plasmide suicide et gène cassette :s
Bonjour,
J'ai besoin de votre aide. Je dois étudier un article, et j'y ai passé beaucoup de temps, mais je m'attarde maintenant aux détails techniques. Et j'ai rencontré un problème de compréhension :
Le but des auteurs était de rajouter à deux gènes (qu'on nommera x1 et x2) un épitope différent (p1 (au bout du gène X1) et p2 (au bout du gène x2)). Pour faire cela ils ont utilisés deux techniques :
-la première était d'insérer le premier épitope par un plasmide suicide. Mais qu'est-ce que c'est ?? Je n'ai pas réussi à trouver...
-la deuxième : utiliser un gène cassette (par exemple x1-p1) d'après la technique Datsenko et wanner (j'ai essayé de lire de la biblio dessus mais j'ai totalement été larguée).
Mais pour que cette cassette aille remplacer le gène x initial, il fallait bien qu'il y ait un site attc à côté de ce gène non ? Comment ça se fait ? Dans une bactérie je ne pense pas qu'il y ait un gène attc à côté de chaque gène...
Et pourquoi utiliser ces deux techniques ?? Pourquoi ne pas insérer les deux épitopes avec une seule des deux techniques ?
Voilà, j'espère que c'est clair :s.
Merci de votre attention
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