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Gel d'électrophorèse et PCR



  1. #1
    biomol05

    Gel d'électrophorèse et PCR


    ------

    Bonjour,

    J'avais 2 amorces, et j'ai trouvé une séquence de 130 pb. On fait une réaction de PCR qu'on met sur gel d'agarose pour différents organes.

    Dans mon exercice, sur le gel, je retrouve une séquence à 130 et à 150 pb. Certains organes ont soit 150, soit 130, soit les 2 ou soit aucun.

    Je ne comprends pas pourquoi ? Il s'agit de la question 4 de ma pièce jointe.

    -----
    Images attachées Images attachées
    Dernière modification par biomol05 ; 11/05/2012 à 18h07.

  2. #2
    piwi

    Re : Gel d'électrophorèse et PCR

    Bonsoir.

    Décidément. La biologie moléculaire n'est pas votre fort
    Ce n'est pas des PCR qui ont été faites mais des RT-PCR. C'est très différent car la matrice n'est pas de l'ADN génomique mais une banque de cDNA construite à partir des ARN extraits des différents tissus. Dés lors, si vous avez des variations dans les cDNA, cela signifie qu'il existe deux variétés d'ARN contenant les séquences de vos primers. On peut avancer deux explications non exclusives. La première est assez classique et vous devriez la connaître et tient aux mécanismes de maturation des ARN. La seconde, est peut être moins évidente, je vous la donne. Il peut exister deux isotypes de votre gène d'intérêt, c'est à dire qu' à un moment de l'évolution, le gène a été dupliqué dans le génome et les deux versions ont évolué indépendamment. Ceci peut expliquer que vous ayez deux bandes du fait des variations de séquences au cours de l'évolution.

    Cordialement,
    piwi
    Je sers la science et c'est ma joie.... Il parait.

  3. #3
    biomol05

    Re : Gel d'électrophorèse et PCR

    En effet, la bio moléculaire n'est pas la matière la plus facile, pour ma part.

    Ce à quoi j'avais pensé, c'était qu'il y aurait eu des insertions de séquences lors du PCR et c'est pour cela que ça m'aurait donné une séquence de 150 pb au lieu de 130 pb. Est-ce que ce serait possible ?

  4. #4
    piwi

    Re : Gel d'électrophorèse et PCR

    Bonjour,

    Je n'ai pas compris votre proposition. Soyez basique et forgez votre réponse en fonction de ce qui se trouve dans votre cours. Je ne pense pas que vos enseignants soient en train de tenter de vous faire réécrire la biologie. Cherchez au chapitre maturation des ARN.

    piwi
    Je sers la science et c'est ma joie.... Il parait.

  5. A voir en vidéo sur Futura
  6. #5
    bello2l

    Re : Gel d'électrophorèse et PCR

    Quelq'un a t-il comprit ses 2 numéros :

    1- Vous désirez ensuite créer une souris transgénique qui exprimera cette protéine en fusion avec
    la protéine GFP. Vous devez donc introduire dans des cellules ES un transgène contenant la
    séquence de GFP et la région codante de votre nouvelle protéine en phase, et sous le contrôle d’un
    promoteur. Pour créer votre ADN recombinant, vous devrez utiliser le site EcoRI (GAATTC) présent
    à la fin de la séquence GFP dans votre vecteur. La fin de la séquence de GFP est représentée
    ci-dessous. Les triplets vous indiquent le cadre de lecture:
    ...TCC GGC CGG ACT CAG ATC TCG AGC TCA AGC TTC GAA TTC TGC ...
    Proposez une amorce de 20 nucléotides incluant le site EcoRI qui vous permettra, avec une
    autre amorce antisens (non montrée), d’amplifier spécifiquement la région codante pour l’insérer
    dans cette construction en phase avec GFP.
    Réponse:...

    2- Une fois inséré dans le génome de la souris, cette construction donnera une protéine chimérique
    GFP-X. Pour que cette protéine s’exprime spécifiquement dans les fibroblastes, par exemple,
    la séquence transgénique devra être insérée à proximité de séquences régulatrices dirigeant
    l’expression dans les fibroblastes. Expliquez comment l’expression du transgène peut être guidé
    par le choix du promoteur et des séquences régulatrices.

    Réponse: ...

  7. #6
    bello2l

    Re : Gel d'électrophorèse et PCR

    Pour le numéro 4, j'ai comprit la raison par rapport a l'évolution... Sinon je me demande pourquoi dans certains organes toutes la séquence amplifier sexprime (150 pb), alors que pour dautre tissus il y a une 20 nt qui manque!!!!!

  8. #7
    Bio01

    Re : Gel d'électrophorèse et PCR

    Bonsoir, j'aurais moi aussi besoin d'explications pour le numéro 3 du document! Est-ce que quelqu'un pourrait m'aider svp?

  9. #8
    piwi

    Re : Gel d'électrophorèse et PCR

    Bonjour,

    J'ai réalisé en lisant plus sérieusement le document qui est joint à la discussion que cet exercice fait partie d'un examen. Du coup je suis mal à l'aise à vous donner des réponses plus explicites. J'en ai déjà beaucoup fait au travers des différentes discussions ouvertes sur le forum, et je ne voudrais pas biaiser le travail d'évaluation d'un enseignant.

    Je suis désolé, mais je ne vous aiderais pas plus.

    Cordialement,
    piwi
    Je sers la science et c'est ma joie.... Il parait.

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