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Isolement des protéines du périplasme de Bactéries + Test d'activité spé d'une protéine en SDS-PAGE



  1. #1
    Benax

    Isolement des protéines du périplasme de Bactéries + Test d'activité spé d'une protéine en SDS-PAGE


    ------

    Bonjour à tous,
    Alors voilà, je suis entrain de faire une analyse d'article en ce moment d'une étude qui traite du mécanisme de transport trans-membranaire d'une superoxyde dismutase (SodA) vers le périplasme par la voie SecA.

    Pour isoler le périplasme et prouver que cette protéine est dedans ils utilisent deux techniques qu'ils disent complémentaires:
    - le choc hypo-osmotique
    -le traitement au lysozyme

    Alors ce que je ne comprend pas c'est comment à partir d'une choc hypo-osmotique on peut isoler uniquement le périplasme dans les sphéroplaste qui sont sensés se former. Car il montrent par la suite que dans leur préparation de périplasme il n'y a aucune contamination du cytoplasme? En gros comment ce choc hypo-osmotique ou le traitement au lysozymes peuvent t ils permettre d'isoler ce tout petit espace intermembranaire sans contamination du milieu de culture ou du cytoplasme?

    Merci beaucoup de vos réponses!

    Benjamin

    -----

  2. #2
    Benax

    Re : Isolement des protéines du périplasme de Bactéries + Test d'activité spé d'une protéine en SDS-

    Ps: pour la première question j'ai oublié de dire qu'on est chez des bactéries a Gram- type E.coli ect...

    Je voulais mettre ma deuxième question dans une autre discussion mais j'ai oublié de l'enlever du titre...
    Alors je pense que c'est plutôt une histoire de vocabulaire, mais pour prouver la localisation de la protéine dont ils étudient l'adressage, les auteurs parlent toujours de tester l'activité spécifique de SodA par SDS-PAGE ou autres techniques d'électrophorèse.
    Ce que je comprend pas c'est le lien entre activité spécifique et électrophorèse. L'électrophorèse en sds-page permet de séparer les protéines selon leur taille et donc d'identifier des protéines dans des extrait donnés, mais quel rapport avec l'activité spécifique de la protéine? serait-ce simplement le fait que comme ils on des préparation périplasmique pure de contamination et qu'il test la présence de la protéine SodA dans ce compartiment qu'ils appellent ça activité spécifique "du périplasme"?

    merci de vos réponses!

    Benjamin

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