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purif protéine



  1. #1
    gorben

    purif protéine


    ------

    bonjour à tous,

    Est ce que vous savez si une proteine purifiée par HPLC est denaturée? Je sougaiterais purifier une enzyme fonctionnelle de cette maniere mais je ne trouve pas l'info sur le net.

    J'aurais tendance à dire que l'utilisation d'un solvant en tant que phase de migration est incompatible avec une enzyme fonctionnelle mais j'aurais souhaité avoir votre avis...

    Merci!

    -----

  2. #2
    mimosa

    Re : purif proteine

    pourquoi tu ne fais pas un gel SDS-PAGE pour la purifier et alors là tu es sure qu'elle est toujours active?

  3. #3
    gorben

    Re : purif proteine

    Citation Envoyé par mimosa
    pourquoi tu ne fais pas un gel SDS-PAGE pour la purifier et alors là tu es sure qu'elle est toujours active?
    Salut
    Le SDS est un agent denaturant.

    c'est une RNA pol que je cherche à puririfer, sur SDS-page je vois bien les 5 sous-unités separée, je m'en sert pour verifier le contenu en beta/beta' de mes differentes fractions lors de ma purif mais ... je GALERE!!! c'est pour ca que je pensais à la HPLC...

    D'ailleurs à ce propos, si qq'un qui est dans un labo de biochimie qui a l'habitude de purif un peu chiante je suis ouvert pour une eventuelle collab ou un eventuel deplacement dans les locaux pour purifier mon enzyme...

    a+

  4. #4
    flashman

    Re : purif proteine

    par HPLC la structure secondaire et tertiaire ne devrait pas trop souffrir mais si elle a des sous unités tu risques malheureusement de les dissocier donc c'est pas une bonne idée mais tu peux toujours essayer, si tu vois plusieurs pics c'est que tu as dissocié les su.

  5. A voir en vidéo sur Futura

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