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Révélation protéines au AgNO3



  1. #1
    LamCha

    Exclamation Révélation protéines au AgNO3


    ------

    Bonjour,
    Voilà j'ai effectué pas mal de recherches mais je ne trouve pas ce que je veux exactement.
    Je fais en stage en entreprise de fabrication d'enzyme, et je souhaite effectuer une électrophorèse en condition native sur les protéines des enzymes.
    Pour cela je fais migrer mon électro et ensuite le gel (en polyacrylamide) je le révèle au nitrate d'argent.
    Je voudrais simplement avoir le principe détaillé de la révélation des protéines par le nitrate d'argent. (Qu'est ce qui se passe? Pourquoi les protéines? etc..)
    Merci par avance !

    -----

  2. #2
    cecilef

    Re : Révélation protéines au AgNO3

    Bonjour,

    Voici ce que j'ai trouvé : Etant mille fois plus sensible que le bleu de coomassie, la coloration au nitrate d'argent permet de détecter des spots contenant 0,1 ng de protéines. Elle présente néanmoins certains inconvénients : la stœchiométrie de la coloration n'est pas totalement linéaire, la reproductibilité est difficile à obtenir et certaines protéines sont peu ou pas colorées par cette méthode. pour la linéarité : les colorations au nitrate d'argent sont sensibles, mais dépendent de la composition en acide aminés et donc ne sont pas linéaires. On ne peut pas utiliser cette méthode pour comparer des concentrations de protéines.


    et voici pour le principe : Les groupe sulfhydrile et carboxylique des chaines latérales des protéines peuvent réduire l'ion argent.
    L'ion argent réduit est sensible à la lumière (principe du film photographique).
    La réaction est stoppée en milieu acide
    en espérant t'avoir aidé

  3. #3
    LamCha

    Re : Révélation protéines au AgNO3

    Je te remercie grandement pour ta réponse complète!
    Je voudrais juste avoir la source que tu as utilisé, pour l'introduire dans ma bibliographie.

    Merci encore !

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