Bonjjour, je passe des partiels prochainement et je voulais savoir si mes exerces étaient correcte j'ai trouvé un annale que j'ai essayer de faire
vous trouver le sujet ci joint
On souhaite purifier une enzyme a partir d'un extrait cellulaire sur une colonne de DEAE fractogel
l'élution est réalisée avec un gradient de NacL de 0 à 0,15. on récolte des fractions de 3ml
On réaliser une mesure enzymatique de chaque fraction en introduisant 10 µL d'enzyme avec du pnitrophenyl acetate comme substrat du pnitrophénol se forme.
A quelle longueur d'onde réalise t-on le dosage ?
1. On choisit de faire le dosage à 420 nm car seul le produit absorbe et pour laquelle l'absorbance est maximale.
On rassemble les fractions ayant les plus forte activités enzymatique
Déterminer l'activité enzymatique totale pour l'ensemble des fractions J'ai séléectionné les fractions 27, 28, 29 donc en faisant un pool on obtient 9ml
Je ne sais pas si il faut calculer l'activité enzymatique pour chaque fractions et les additionnées ou si on peut se permettre de faire une moyenne
de variation d'absorbance pour les 3, voici mon calcul
j'additionne les valeurs d'absorance maximale censé contenir notre enzyme.
[A27 + A28 + A29]/εp-nitro]x volume du pool des fractions
[(0,5 + 0,9+ 0,65)/ 15 000] X 9ml = 1,23µmol.min-1
Puis pour calculer l'activité enzymatique totale, on fait
AE x (volume de l'extrait/volume mesure)
donc 1,23µmol.min-1 X (9ml/30µmol) = 369µmol.min-1
merci
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