Transformation génétique du tabac par agrobacterium

[invite7a35f72e]

Bonjour à tous,

En laboratoire nous avons réalisé une transformation génétique du tabac par le biais de la bactérie agrobactérium tumefaciens, pour ceux qui ne connaissent pas bien le principe, c'est simple: On a la bactérie qui contient un vecteur incluant entre autre un gène codant pour une résistance à un antibiotique ici la kanamycine. On va faire découper des petits carrés dans la feuille de tabac qu'on va mettre en contact avec la bactérie en question et puis on va la mettre en culture dans une boite de pétri avec un milieu MS104 (= MS + BAP (cytokinines) + NAA (auxine)) et l'antibiotique en question la kanamycine + de la carbenicilline (qui apparemment sert à tuer la bactérie, mais ça je ne suis pas très sûre) qui sert de milieu de sélection étant donné que si ça marche les cals qui se formeront résulteront des cellules végétales qui auront bien intégré le gène codant pour la résistance à la kanamycine.

On a également réalisé des témoins qui n'ont pas été mis en contact avec la bactérie du tout et qui ont été cultivés sans antibiotiques au départ. Cependant, ces témoins ont ensuite été séparés en 2 groupes: certains ont été transférés sur un milieu MS104 (= MS + BAP (cytokinine) + NAA (auxine)) sans antibiotiques (T+) et les autres (T-) ont été transférés sur un milieu MS104 avec antibiotiques comme pour les explants infectés avec la bactérie agrobactérium ci-dessus.

Donc nous avons observés le développement, des cals, bourgeons et autres sur chacun des 3 cas, et je dois donc interprétés les résultats qui sont en gros:

Qu'on observe un développement de cals, bourgeons, plantule sur les explants infectés par la bactéries (donc transformés vu qu'ils ont exprimés une résistance à la kanamycine) et également pour le témoin T+ concernant les explants qui n'ont pas été mis en contact avec la bactérie et qui ont été transférés sur un milieu MS104 (voir descriptif plus haut) mais dépourvu d'antibiotiques (kamycine et carbenicilline).

Cependant, il n'y a eu aucun développement chez les témoins T- qui eux ont été transférés sur un milieu MS104 plus antibiotiques (kanamycine et carbenicilline). D

Mon problème c'est que je n'arrive pas à comprendre pourquoi, justement, les T- n'ont présenté aucun développement, je me dis que c'est à cause des antibiotiques parce que c'est la seule chose qui diffère avec les T+, mais je ne vois pas l'intérêt étant donné qu'ils n'ont pas été mis en contact avec la bactérie.
Si quelqu'un avait une piste....

Merci d'avance
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[invited6b4420b]

Salut,

une explication serait que les antibio ont tués ta plante de tabac... Ou que celle-ci ne résiste pas à ces derniers.. Tu as fais des tests avec d'autres plantes avec les mêmes antibio ?

[invite7a35f72e]

Salut, oui c'est à peu près ça finalement j'ai trouvé.
En fait la kanamycine inhibe le développement des cals à une certaine concentration (jai trouvé ça dans un article), ce qui fait que ça ne s'est pas développé, les témoins n'ayant pas reçu le gène de résistance à la kanamycine.

C'était simple finalement, une bonne nuit de sommeil et c'est apparu clair dans ma tête!!

Merci d'avoir pris le temps de répondre

[invited6b4420b]

Ah ben tien, j'en étais pas si loin que ça... J'allais proposer l'hypothèse de la concentration lors de mon prochain message si ta réponse s’avérait positive ;D

Content d'avoir presque pu apporter un petit quelque chose à l'étude. J'aurais appris un truc !

Bon courage et très bonne continuation !

PS : Et bonne nuit

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite7a35f72e]

Mercii !! A Toi aussi