Bonjour!
Je ne comprends pas pourquoi on utilise la PCR pour diagnostiquer une mutation ? puisque la PCR sert à amplifier la séquence d'ADN que l'on a, alors pourquoi amplifier une séquence pour voir si elle est mutée ou non? Par exemple, pour diagnostiquer la Drépanocytose, on utilise la méthode PCR mais comment ? Je ne comprends pas!
Merci d'avance
Il y a de multiples variantes de PCR pour détecter une mutation. Par exemple, tu prends un couple d'amorce dans lequel une des deux amorces a son extrémité 3' qui s'hybride sur un nucléotide muté ou non. Si tu choisi une amorce spécifique du nucléotide non muté, la présence d'une mutation va empêcher l'hybridation de l'extrémité 3' de l'amorce, et la polymérase ne pourra pas amplifier le fragment. Après la PCR, en faisant un gel d'agarose, si on voit une bande à la taille attendu, cela veut dire qu'il n'y a pas de mutation, s'il n'y a pas de bande c'est qu'il y a une mutation. D'autres méthodes existent.
Merci pour votre réponse! Mais ce que je ne comprends pas, c'est qu'après la PCR on aura beaucoup de fragments d'ADN, mais nous servent-ils tous? puisque un seul suffit à détecter s'il y a mutation ou non.
Cordialement.
Un seul fragment d'ADN n'est absolument pas détectable si on effectue une visualisation sur gel après coloration avec du syBRgreen. Il y a nécessité d'avoir une forte amplification du fragment pour qu'il soit bien détectable.
Ah d'accord merci beaucoup ! une autre question s'il vous plaît, donc pour le Southern Blot aussi, par exemple, où l'on aurait deux allèles à identifier il faut qu'on amplifie ces allèles pour pouvoir les voir sur la membrane de cellulose ?
