Bonjour,

Toute la session, j'ai bossé à isoler l'ADN de V. fischeri afin de le digérer et d'isoler le fameux opéron lux, qui confère à la bactérie sa bioluminescence. J'en suis à ma dernière étape, nul besoin de vous dire que les précédentes ont toutes échouées, c'était un vrai désastre, mais bon, il faut mener mon projet à terme.

J'ai mes tubes contenant mon vecteur recombinant, du pGem ligué à mon opéron lux. J'y rajoute mes cellules de E.coli devenu compétentes par traitement au CaCl2 glacial, ce qui affaibli la membrane pour la rendre perméable au vecteur recombinant.

Ensuite, j'envoie le mélange de cellules et de vecteurs dans un bain thermique à 42oC pour 90 secondes, précisément. Ensuite, je met directement sur glace. J'ajoute du milieu de culture LB et j'incube le tout à 37oC pour 60 minutes. Je me demandais en quoi cette incubation était nécessaire... Est-ce que la croissance des bactéries transformées commence pendant cette incubation? Ou est ce que le vecteur pénètre dans la bactérie pendant cette période?

Merci de vos réponses grandement appréciées,
Julien