Interpréter une courbe de fusion PCR

[inviteb71ae72e]

Bonjour,

Je suis en stage et je pratique l'extraction d'ARN, la RT-PCR et la PCR.
Je fais de la PCR quantitative (Sybr Green) sur le gène de l'actine. Après amplification, je réalise une courbe de fusion. Lors de l'analyse de la courbe (module Tm calling), au lieu du pic habituellement rencontré, j'ai obtenu un plateau.
Je n'arrive pas à comprendre ce plateau. Sauriez-vous expliquer cette observation?
Merci de votre attention.

Panda7
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[Flyingbike]

une image nous aiderait certainement !

pour le plateau, c'est mauvais signe, mais déjà avez vous eu un signal normal en intensité (ie l'amplification a été efficace ?)

[inviteb71ae72e]

Bonjour,

Voila l'image ci-dessous de la courbe de fusion.


Merci

Panda7

[Flyingbike]

ca peut etre compliqué. On peut notamment penser a une température d'annealing trop froide, ce qui fait du non spé. Qelles sont vos amorces et votre protocole de PCR ? quels sont les échantillons ?

[A voir en vidéo sur Futura]