Bonjours,
voilà j'ai une préparation de TP à rendre pour mercredi. J'ai cherchée sur internet mais je suis toujours bloquée :S
j'aimerai savoir:
-comment introduire un ADN plasmidique exogène dans une bactérie
-comment calculer la taille de fragments en analysant des cartes plasmidiques
Merci en avance pour aide
Salut,
Pour introduire de l'ADN chez une bactérie tu as 3 façons :
- la transformation
- la conjugaison
- la transduction
Si tu veux introduire un plasmide en entier ou un voire des gènes dans une bactérie il y aurait la conjugaison où l'on a une bactérie donnatrice qui va donner le plasmide à une bactérie réceptrice par conjugaison. Pour que la donnatrice puisse donner son plasmide il faut que celui-ci possède les gènes "tra" indispensable pour la conjugaison car ils codent pour la formation des pili permettant le contact entre les 2 bactéries mais aussi le transfert de l'adn de la donnatrice vers la réceptrice. On appelle aussi ce plasmide le facteur F. Toutefois il est rare que le plasmide entier soit transféré jusqu'à la réceptrice car généralement il y a un décrochage des 2 bactéries avant.
Après je ne sais pas si c'est possible mais tu pourrais peut-être fragmenter ton plasmide, l'injecter dans l'environnement. ensuite tu rend tes bactérie transformante c'est un état où les bactéries sont capable d'incorporer de l'ADN provenant de l'environnement. Pour faciliter l'incorporation je crois que tu peux utiliser des techniques d'électroporation.
Bonne soirée
merci beaucoup, mais je crois qu'il faut utiliser la transformation car après on me demande un exemple de transformation.
je connais la théorie de ce mécanisme mais après je ne l'ai jamais pratiqué en TP.
Après pour la carte plasmidique si tu sais par quelle enzyme tu fragmentes tes séquences je penses que tu peux retrouver la taille des fragments. Car si la carte plasmidique est comme une carte de génome généralement tu as des sites de restrictions dessus.
Sans nom 1.pdf
c'est ce que j'ai comme schéma, et je ne vois pas comment calculer la taille des fragments.
je suis désoler de poser autant de questions
Il faut que j'attende que l'admin valide ta pièce jointe. je ne sais pas combien de temps ça prend
ah ok je ne savais pas, c'est la première fois que je poste un message
ok alors sur tes 3 plasmides tu as un ou plusieurs sites de restriction à EcoRI c'est un site que va reconnaître ton enzyme EcoRI et va donc couper ton ADN plasmidique à cette endroit précisément. Tu connais la taille de tes plasmides en pb et tu sais sur quel pb se situe le site de restriction. Donc à partir de là tu peux calculer les différents fragments obtenus après clivage de l'enzyme. De plus tu as des fragments de taille différente notamment un ADN linéarisé je pense que c'est peut-être aussi pour voir quel taille d'ADN exogène est capable d'incorporer une bactérie transformante.
Je pense que ça devrait aller, si tu as d'autres questions n'hésite j'essaierais d'y répondre.
