Bonjour à tous,
Je rencontre récemment un problème avec mes migrations SDS page : la migration ne se fait pas de manière "droite", mais remonte de chacun des deux cotés, formant un front de migration en sourire, très génant s'il y a des échantillons placés aux extrémités.
Auriez vous des pistes pour résoudre ce problème ?
Merci
Cordialement,
Benoit
si tu as des puits en rab de chaque coté, dépose du tampon sans protéines (genre laemmli dilué comme si il y avait des protéines) dans chacun des puits libres de chaque coté. Idéalement, il faut centrer les dépots et "combler" les puits vides de chaque coté. Tu peux peut être essayer de migrer plus doucement également
Assure toi aussi qu'aucune fuite de tampon n'ai lieu.
Meme sans etre une fuite super rapide.
Bonjour,
2 causes possibles :
1) Voltage excessif. La chaleur perturbe la migration électrophorétique. Il faut particulièrement éviter les situations où le gel est soumis à des températures différentes. Les gels en plaque sont particulièrement sensible et il est fréquent que le centre des gels surchauffe si on est trop pressé. Cela cause une migration plus lente des échantillons des puits périphériques caractérisé par des bandes protéiques ayant migré plus rapidement au centre du gel, créant un patron ayant la forme d'un sourire.... Pour assurer un refroidissement uniforme de tout le gel, diminuer le voltage et augmenter la durée de migration. Opter pour des gels plus petits avec des plaques plus courtes. Si grandes plaques requises (gel 2D), opter pour un système horizontal avec refroidissement à eau.
2) Si on laisse des puits inoccupés par un échantillon, les protéines des puits adjacents peuvent mal migrer, c''est ce qu'on appelle 'l'effet de bordure". Ce problème est facilement réglé en mettant simplement du tampon d'échantillon (1 X) dans ces puits inutilisés.
Cordialement,
BCG
