Identification d'une protéine sérique

[invitef886667d]

Bonjour,

j'aurai besoin de réponses. Voilà, cette semaine j'ai effectué une migration sur gel de plusieurs échantillons de sérums humains différents. Il s'agit d'électrophorèse SDS PAGE. La migration des protéines sériques se fait donc en fonctions de leurs tailles. J'ai pu identifier sur le gel plusieurs protéines sériques. J'ai pu identifier l'albumine sérique et donc aussi les immunoglobulines, qui migrent comme prévu moins loin que l'albumine. Cependant, j'ai observé qu'une bande avait migré plus loin que l'albumine, cela signifie qu'elle de taille plus faible que l'albumine qui est de 65 kDa. N'ayant pas utilisé de marqueurs de taille, je ne saurais vous dire à quelle taille correspond cette bande . J'ai recherché à quelle protéine sérique correspond cette bande. Mais, je dois reconnaître que pour le moment je n'ai pas trouvé, puisque dans les différents bibliographiques il est dit que l'albumine est la protéine qui migre le plus loin lors de ce genre d'électrophorèse. Si l'un ou l'une de vous peux m'aider, en me suggérant quelques idées pour orienter mes recherches, je lui serai reconnaissant. En vous remerciant d'avance
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[jmbowie]

Bonjour,
Je te conseille de refaire migrer les échantillons avec le marqueur de poids moléculaires. On peut aussi envisager qu'il s'agisse de protéines non sériques (problèmes de purification), d'éventuels précurseurs ou bien au contraire de produits de dégradation de protéines sériques. Mais avant tout refaire migrer et confirmer la taille.

[Flyingbike]

en condition dénaturante ? comment les protéines ont été visualisées ?

[invitee51ce47c]

Bonjour,

Sur un gel SDS-PAGE classique, une petite bande juste avant l'albumine représente la transthyretin (aussi nommée la pré-albumine). Poids moléculaire = 55 kDa.

http://en.wikipedia.org/wiki/Transthyretin

Cordialement,

BCG

[A voir en vidéo sur Futura]

[Moumoutte]

Bonjour,

je rejoins Flyingbike: comment avez-vous visualisé mais surtout identifié vos protéines?
Si vous n'avez pas utilisé de marqueur de poids moléculaire peut être que la bande qui a migré le plus loin est tout simplement l'albumine et qu'il faut en fait chercher à quoi correspondent les bandes situées avant (Ig et ???)

M.

[invitee51ce47c]

Bonjour,

Je partage entièrement les critiques déjà formulées. Toutefois, l'albumine sérique est de loin la protéine la plus abondante dans le sérum humain, on ne peut vraiment pas passer à côté de son identification sur un gel SDS-PAGE 12% standard. Les globulines alpha, béta et gamma sont largement minoritaires et sont nettement moins colorées sur le gel.

Un marqueur de poids moléculaire ne constitue pas en soi une preuve d'identification, mais constitue tout au plus une très bonne indication. On peut refaire l'analyse en conditions réductrice (+ DTT) et non-réductrice (sans DTT) afin de différencier et identifier les chaînes lourdes (50 kDa) et légères (25 kDa) des immunoglobulines G par exemple (http://www.good-biotech.com/products...php?type_id=22).

Si on n'a pas accès à un labo de protéomique digne de ce nom et sans devoir investir dans des procédures longues et coûteuses, il serait utile de procéder à une analyse plus précise des protéines sériques par gel 2D SDS-PAGE et de comparer visuellement les cartes des spots obtenus face aux cartes de référence déjà établies (http://world-2dpage.expasy.org/swiss-2dpage/).

Cordialement,

BCG