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problème de visualisation sur gel agarose



  1. #1
    Kyle_XY

    problème de visualisation sur gel agarose

    Bonjour , j'ai un autre problème avec l'électrophorèse.
    Si j'ai bien compris , le gel d'agarose est une matière poreuse qu'on peut couler sous la forme d'un gel et qu'on va poser entre les 2 électrodes. Selon la taille des fragments qu'on va poser dans les puits , ils vont se déplacer plus ou moins rapidement dans le gel. Ensuite lorsqu'on me présente le résultat de l'électrophorèse , je ne suis pas sûre d'avoir réelement compris ce qu'il s'est passé. Si le gel permet seulement de faire passer les fragments plus ou moins rapidement , celà voudraitdire qu'après un temps suffisament long ils finiront tous par atteindre la cathode et que les bandes qu'on voit en UV sont simplement un instantané de ce qu'il se passe ? Je veux dire le gel leur permet de migrer et les bandes que l'on voit représente l'endroit où ils sont " en suspension" ?

    -----


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  3. #2
    Saswordz

    Re : problème de visualisation sur gel agarose

    Bonjour,

    Il y a des standards de migration pour un gel d'agarose. Quand tu places ton marqueur de taille en référence tu sais qu'il est bon pour une durée limitée de migration (souvent 2h si je ne m'abuse).
    Il faut évidemment arrêter la migration à un moment donné, sinon tes premières bandes vont sortir du gel et se retrouver dans le tampon.

  4. #3
    Kyle_XY

    Re : problème de visualisation sur gel agarose

    donc grace au marqueur , on sait que si le fragment a une certaine taille il se retrouvera a un certain endroit a un certain moment ?

  5. #4
    Saswordz

    Re : problème de visualisation sur gel agarose

    En général tu arrêtes ton électrophorèse avant que ton front de migration n'atteigne le bout du gel.
    Le marqueur de taille est déterminée pour ne pas sortir du gel avant. Tu sais quels sont les fragments de ton marqueur de taille, tu peux donc comparer les bandes de ton essai à celles de ton marqueur.

  6. #5
    Kyle_XY

    Re : problème de visualisation sur gel agarose

    J'ai compris merci j'ai néanmoins une autre petite question. pour rendre les bandes fluorescentes , il faut reprendre le gel et le colorer avec un colorant qui s'intercalle entre les paires d'ADN. ça veut dire que dans le gel , les fragments sont callés dans les mailles du gel ?

  7. A voir en vidéo sur Futura
  8. #6
    Saswordz

    Re : problème de visualisation sur gel agarose

    Les fragments sont de tout façon à l'intérieur du gel, le colorant va donc pouvoir s'intercaler dedans et une révélation aux UV sera alors possible.
    Je ne suis pas suffisamment calé en électrophorèse pour te donner plus de détails à ce sujet.

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