Interaction Anticorps/Antigène

[invitec0a626b7]

Bonsoir je voudrais savoir pourquoi un anticorps et un antigène ayant une très grande affinité sur un test ELISA ne réagissent pas en immunodiffusion ou en en Western-blot ?

Cordialement
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[invite2d914250]

Les tests ELISA sont généralement très sensibles, mais ont une spécificité "moindre" par rapport à un western blot, qui lui, sera moins sensible, ce qui explique ce que tu décris.

[invitec0a626b7]

Merci, m'enfin tu ré-écris un peu ce que j'ai dit...

Précisement, pourquoi l'affinité est-elle si différente ? ^^

[invite2d914250]

Non je l'ai plutôt reformulé en termes correct, car ça n'a rien à voir avec l'affinité des anticorps pour les antigènes.

Un WB et un ELISA constituent des méthodes très différentes.

Prenons l'exemple du VIH : l'ELISA contient un mélange de protéines recombinantes et de synthèse du VIH en grande quantité : donc un mélange d'Ac va réagir avec un mélange d'Ag, et le signal détecté va généralement encore être amplifié.

Alors qu'un WB, on a une plus grande spécificité car on a une bande spécifique de chaque antigène, mais la lecture se fait à l'oeil nu, donc même si les anticorps se fixent aux Ag, s'ils sont en faible quantité, en lisant à l'oeil nu on peut tout à fait passer à côté d'une réaction.

Ils réagissent, mais la réaction n'est pas détectée, c'est là toute la différence.

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite513ac0a6]

Je suis pas specialiste de ces questions techniques mais c'est du a l'epitope particulier de ta proteine d'interet qui est reconnu par ton anticorps, et qui peut ne pas etre accessible, dans la bonne conformation ou ne pas posseder les modifications post-traductionelles requises pour sa reconnaissance dans certaines conditions (faut toujours garder en tete que du materiel biologique va se modifier selon la facon dont tu le process, par exemple avec certains tampons d'extractions, fixateurs ou autres, je vais pas non plus faire une liste exhaustive).

Par exemple, certains anticorps pour WB vont reconnaitre une proteine que si elle est denaturee, l'inverse existe aussi. Pour l'IHC, certains vont marcher sur tissus fixes+inclus en parrafine+epitope retrieval, d'autres uniquement sur tissus frais. Encore une fois je vais pas te faire toute la liste