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Rendement de transfection



  1. #1
    Boris29

    Rendement de transfection


    ------

    Bonjour.

    Après avoir mesurer des DO à 420 nm, on me demande de calculer le rendement de transfection dans chaque tube par rapport à la préparation qui donne l'activité la plus élevée.

    L'activité la plus élevée correspond a la DO la plus importante ?

    Pour chaque tube je dois donc faire Do.tube/Do.max * 100 ?

    Merci de votre aide.

    -----

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  3. #2
    bas_d

    Re : Rendement de transfection

    Tu mesures quoi une activité enzymatique ?

  4. #3
    bas_d

    Re : Rendement de transfection

    Le D.O augmente avec la quantité de produit formé, il te permet donc de mesurer ton activité enzymatique. Le DO max te donne le pH optimal de l'enzyme, en utilisant la formule que tu as écrite tu peux avoir l'activité relative de l'enzyme à un pH donné.
    Tu peux ainsi en élaborant une gamme de pH trouvé les bornes de pH auxquelles ton enzyme fonctionne.
    Cela fonctionne uniquement si le substrat de l'enzyme est incolore mais que le produit ne l'est pas.

    En espérant t'avoir aidé.

    PS : Dans mon exemple j'ai pris le pH comme facteur que je fais varier mais ça peut être n'importe lequel.
    Dernière modification par bas_d ; 20/03/2013 à 19h15.

  5. #4
    Boris29

    Re : Rendement de transfection

    L'intitulé exact est le suivant :

    Je dois réaliser un test d'activité de la B-galactosidase dans des surnageants cellulaires pour vérifier l'efficacité de transfection.
    Les tubes contiennent notamment du phosphate de sodium et de l'ONPG.
    J'incube à 37°C jusqu'à l'apparition d'une couleur jaune. Puis j'arrête la réaction et je mesure la DO à 420 nm.

    Avec les DO obtenues je dois calculer le rendement de transfection par rapport à la préparation qui donne l'activité la plus élevée.

  6. #5
    bas_d

    Re : Rendement de transfection

    Oui c'est bien ça donc plus la solution est jaune plus le D.O est élevé et donc plus la quantité de produit crée est importante. Tout cela est proportionnel à ton activité enzymatique.

    Utilise la formule DO tube/ DO max x 100

  7. A voir en vidéo sur Futura
  8. #6
    Boris29

    Re : Rendement de transfection

    Merci de ton aide !

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