bonjour a tous!!
j'aurai besoin d'aide pour comprendre un passage de mon cours auquel je n'ai strictement rien compris, dans lequel il est question de l'analyse de l'activité d'un facteur de transcription par co transfection.
Si une ame charitable avait la bonté de m'expliquer, en gros, le principe de la chose, je lui en serai éternellement redevable (ou du moins ça m'arrangerait bien!!)...
merci d'avance!
Vous transfectez votre vecteur codant pour votre facteur de transcription avec un autre vecteur portant, lui, une séquence promotrice sur laquelle peut se fixer votre protéine d'intérêt et codant pour une protéine rapportrice dont vous quantifierez la présence de la manière qui vous semblera la plus appropriée (dosage d'activité enzymatique, ELISA, réaction colorée, etc...)
Cordialement,
piwi
Je sers la science et c'est ma joie.... Il parait.
une approche classique pour compléter piwi, mais c'est plus de l'étude de promoteur ou de l'interaction entre un FT et son promoteur :
-on transfecte une construction permettant l'expression constitutive d'une protéine capable de transformer un composé X en lumiere A: c'est ton controle de transfection qui te servira a normaliser l'efficacité d'entrée de la construction
-en même temps on transfecte une construction permettant l'exxpression d'une protéine permettant de transformer un composé Y en luimière B, expression dépendant du promoteur que tu veux étudier
(-éventuellement on peut faire exprimer le facteur de transcription sensé se fixer au promoteur étudié)
en calculant le rapport B/A, tu peux avoir un reflet de l'activité transcriptionnelle de ton promoteur et tester l'influence de mutations sur certaines séquences que tu supposes impliquées dans la régulation transcriptionnelle.
(pas évident a comprendre ni a expliquer, si tu veux des détails n'hésite pas !)
merci pour vos réponses! (j'ai galéré, mais j'ai compris!!)
