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transfection



  1. #1
    winnette

    transfection


    ------

    Bonsoir,

    Je rencontre qques pb avec la transfection, je sais que ca consiste à injecter de l'ADN exogène dans une cellule eucaryote.
    Mais peut on injecter de l'ADN "seul" ou faut il forcément utilisé un plasmide? je pense que ma question est à moitié stupide mais je commence à m'embrouiller pas mal...xD

    merci pour les réponses!

    -----

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  3. #2
    LXR

    Re : transfection

    Un plasmide, n'est-ce pas de l'ADN?

  4. #3
    Edelweiss68

    Re : transfection

    J'imagine que vous voulez savoir si l'on peut transfecter l'ADN seul sans vecteur (=ADN nu). La réponse est oui!

  5. #4
    winnette

    Re : transfection

    oui ms le plasmide il est capable de réplication autonome c'est pareil pr mon ptit ADN "seul"? ce que je veux dire c'est que si je taggue un ADNc avec de la GFP par ex et que je transfecte tt ca, jvais bien obtenir une protéine tagguée avec la GFP?

    et j'aurais besoin d'une confirmation (et promis après j'arrete!xD), la transfection permet d'étudier la protéine synthétisé à partir de l'adn c transfecté ou d'étudier les conséquences de la présence de cet ADN?

    en tout cas, merci pr la rep!

  6. #5
    winnette

    Re : transfection

    Edelweiss68 c'était exactement ca!!!
    ms dans ce cas, on pourra pas selectionner les cellules transfectées?

  7. A voir en vidéo sur Futura
  8. #6
    Poussin60

    Re : transfection

    Citation Envoyé par winnette Voir le message
    oui ms le plasmide il est capable de réplication autonome c'est pareil pr mon ptit ADN "seul"?ce que je veux dire c'est que si je taggue un ADNc avec de la GFP par ex et que je transfecte tt ca, jvais bien obtenir une protéine tagguée avec la GFP?
    Il ne faut pas confondre ADNc (qui est issu de la retro-transcription d'ARN et qui est monocaténaire (simple brin)) et plasmide (ADN circulaire et bicaténaire).
    Transfecter un ADNc dans une cellule n'a d'interêt que s'il est "équipé" d'un promoteur qui permettra d'initier sa "re"transcription en ARNm, ce qui est rare (si tant est que ça existe)

    Citation Envoyé par winnette Voir le message
    la transfection permet d'étudier la protéine synthétisé à partir de l'adn c transfecté ou d'étudier les conséquences de la présence de cet ADN?
    Transfecter un plasmide qui code pour une protéine permet effectivement d'étudier l'effet de la surexpression de cette protéine sur le comportement de la cellule. L'impact de la présence d'ADN exogène existe, mais elle est minime.

    Citation Envoyé par Edelweiss68 Voir le message
    J'imagine que vous voulez savoir si l'on peut transfecter l'ADN seul sans vecteur (=ADN nu). La réponse est oui!
    La diffusion passive d'ADN dans une cellule (sans système de vectorisation) est un processus très peu efficace ! On peut le transfecter par des moyens autres qu'avec un vecteur de type lipide cationique (electroporation ou criblage par exemple), mais d'un point de vue technique, un système de vectorisation est indispensable pour transfecter de l'ADN de manière rapide et efficace !

    Citation Envoyé par winnette Voir le message
    ms dans ce cas, on pourra pas selectionner les cellules transfectées?
    Pour faire une selection des cellules transfectées, il faut par exemple que le plasmide possède un gène de résistance à un antibiotique (puromycine par exemple), ainsi seules les cellules transfectées vont survivre pendant une culture en présence de l'antibiotique. On peut aussi utiliser un plasmide qui code pour une protéine de fusion : la séquence nucléotidique de la protéine est flanquée de celle d'un fluorophore qui va être transcrit et traduit en même temps que la protéine. Ainsi, par microscopie à fluorescence, les cellules fluorescentes sont celles qui ont intégré le plasmide et exprimé la protéine d'intérêt.

    En espérant avoir répondu à tes interrogations

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  10. #7
    Poussin60

    Re : transfection

    Citation Envoyé par Poussin60 Voir le message
    L'impact de la présence d'ADN exogène existe, mais elle est minime.


    IL est minime

    Au temps pour moi ...

  11. #8
    winnette

    Re : transfection

    Poussin 60, t'as fini de m'éclaircir les idées!!
    Merci!

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