Bonsoir,
Je rencontre qques pb avec la transfection, je sais que ca consiste à injecter de l'ADN exogène dans une cellule eucaryote.
Mais peut on injecter de l'ADN "seul" ou faut il forcément utilisé un plasmide?je pense que ma question est à moitié stupide mais je commence à m'embrouiller pas mal...xD
merci pour les réponses!
Un plasmide, n'est-ce pas de l'ADN?
J'imagine que vous voulez savoir si l'on peut transfecter l'ADN seul sans vecteur (=ADN nu). La réponse est oui!
oui ms le plasmide il est capable de réplication autonome c'est pareil pr mon ptit ADN "seul"? ce que je veux dire c'est que si je taggue un ADNc avec de la GFP par ex et que je transfecte tt ca, jvais bien obtenir une protéine tagguée avec la GFP?
et j'aurais besoin d'une confirmation (et promis après j'arrete!xD), la transfection permet d'étudier la protéine synthétisé à partir de l'adn c transfecté ou d'étudier les conséquences de la présence de cet ADN?
en tout cas, merci pr la rep!
Edelweiss68 c'était exactement ca!!!
ms dans ce cas, on pourra pas selectionner les cellules transfectées?
Il ne faut pas confondre ADNc (qui est issu de la retro-transcription d'ARN et qui est monocaténaire (simple brin)) et plasmide (ADN circulaire et bicaténaire).Envoyé par winnette
Transfecter un ADNc dans une cellule n'a d'interêt que s'il est "équipé" d'un promoteur qui permettra d'initier sa "re"transcription en ARNm, ce qui est rare (si tant est que ça existe)
Transfecter un plasmide qui code pour une protéine permet effectivement d'étudier l'effet de la surexpression de cette protéine sur le comportement de la cellule. L'impact de la présence d'ADN exogène existe, mais elle est minime.
La diffusion passive d'ADN dans une cellule (sans système de vectorisation) est un processus très peu efficace ! On peut le transfecter par des moyens autres qu'avec un vecteur de type lipide cationique (electroporation ou criblage par exemple), mais d'un point de vue technique, un système de vectorisation est indispensable pour transfecter de l'ADN de manière rapide et efficace !
Pour faire une selection des cellules transfectées, il faut par exemple que le plasmide possède un gène de résistance à un antibiotique (puromycine par exemple), ainsi seules les cellules transfectées vont survivre pendant une culture en présence de l'antibiotique. On peut aussi utiliser un plasmide qui code pour une protéine de fusion : la séquence nucléotidique de la protéine est flanquée de celle d'un fluorophore qui va être transcrit et traduit en même temps que la protéine. Ainsi, par microscopie à fluorescence, les cellules fluorescentes sont celles qui ont intégré le plasmide et exprimé la protéine d'intérêt.
En espérant avoir répondu à tes interrogations
IL est minime
Au temps pour moi ...
Poussin 60, t'as fini de m'éclaircir les idées!!
Merci!
