Amorces peu consommées après PCR

[LilouBZH]

Bonjour,

j'ai un petit souci lors de la réalisation de mes PCR. En effet, à l'issu, j'obtiens bien la bande souhaitée au bon endroit (bonne taille) mais cependant tout en bas de ma migration j'ai de grosses bandes correspondant à mes primers qui n'ont pas été consommés. Je ne vois pas sur quoi jouer (température, etc...). La bande correspondant à ma séquence d’intérêt est très faible. Donc, c'est que mon couple de primers fonctionne (puisqu'il y a bien amplifcation de la séquence attendue) mais le rendement est faible. J'ai respecté les consignes du kit (conc. de primers, etc ...). Est ce que quelqu'un à une idée ?

Merci d'avance pour les réponses...

Bonne journée
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[Flyingbike]

quelle est la concentration des primers ?
y a-t-il assez d'enzyme ?
cela peut aussi etre du a une température d'hybridation trop haute

[LilouBZH]

Salut !

Et bien j'utilise des primers à la concentration de 0.5 microM et l'enzyme à 1 X. D'après le kit je suis à des concentrations moyennes dans l'utilisation de mes primers. J'ai déjà diminué la température et ça m'a donné le même résultat.