Melt curve qPCR

[invite1286ed0b]

Bonjour à tous, j'ai un petit problème sur mes melt curves de qPCR. Je suit 28 gènes + 3 gènes de ref sur une plaque 96 puits et quand je passe mes plaques avec des meltcurves j'ai ce genre de résultats:

Comme on peut le voir les courbes sont bien pour tous mes gènes mais le problème c'est le pré-pic à 70°C, il est plus ou moins important selon les gènes. Je n'arrive pas à savoir si il s'agit de dimères d'amorces, d'une contamination ou autre... se qui m'étonne c'est que ces pré-pic sont tous à la même température.
Si vous pensez qu'il s'agit de dimère, que peut-on faire pour les éviter?

Merci pour votre réponse
Quentin
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[invite1286ed0b]

Sinon pour vous donner plus d'info les plaques sont pré-coaté avec les amorces puis déshydratés en étuves à 60°C. On peut ainsi conserver les plaques 'prêtes à l'emploi pendant quelques semaines'. Avant d'être déposés sur les plaques, les amorces sont réhydratés dans une solution contenant 2 mM de tréhalose (selon la plublication de Jutta Zagon et al, 2011) afin que les amorces résistent à la déshydratation. Pour les melt curve que je vous montre il s'agit d'ADNcde feuille de tomate.

Si quelqu'un à une idée.
Merci et bonne journée

[invitef0362c6c]

As-tu essayé de mettre tes échantillons sur gel pour t'assurer d'y voir une seule bande?

[invite1286ed0b]

oui tous mes amplicons ont été déposés sur gel après PCR, une seule bande pour tous les gènes...

[A voir en vidéo sur Futura]