Répondre à la discussion
Affichage des résultats 1 à 4 sur 4

Melt curve qPCR



  1. #1
    quentin.

    Melt curve qPCR


    ------

    Bonjour à tous, j'ai un petit problème sur mes melt curves de qPCR. Je suit 28 gènes + 3 gènes de ref sur une plaque 96 puits et quand je passe mes plaques avec des meltcurves j'ai ce genre de résultats:
    meltcurve.png
    Comme on peut le voir les courbes sont bien pour tous mes gènes mais le problème c'est le pré-pic à 70°C, il est plus ou moins important selon les gènes. Je n'arrive pas à savoir si il s'agit de dimères d'amorces, d'une contamination ou autre... se qui m'étonne c'est que ces pré-pic sont tous à la même température.
    Si vous pensez qu'il s'agit de dimère, que peut-on faire pour les éviter?

    Merci pour votre réponse
    Quentin

    -----

  2. #2
    quentin.

    Re : Melt curve qPCR

    Sinon pour vous donner plus d'info les plaques sont pré-coaté avec les amorces puis déshydratés en étuves à 60°C. On peut ainsi conserver les plaques 'prêtes à l'emploi pendant quelques semaines'. Avant d'être déposés sur les plaques, les amorces sont réhydratés dans une solution contenant 2 mM de tréhalose (selon la plublication de Jutta Zagon et al, 2011) afin que les amorces résistent à la déshydratation. Pour les melt curve que je vous montre il s'agit d'ADNcde feuille de tomate.

    Si quelqu'un à une idée.
    Merci et bonne journée

  3. #3
    haleckx

    Re : Melt curve qPCR

    As-tu essayé de mettre tes échantillons sur gel pour t'assurer d'y voir une seule bande?
    Endocrinology is simple. You can either have too much of a hormone... or too little.

  4. #4
    quentin.

    Re : Melt curve qPCR

    oui tous mes amplicons ont été déposés sur gel après PCR, une seule bande pour tous les gènes...

Sur le même thème :

Discussions similaires

  1. blackberry curve 960 3G à connecter avec un ordinateur
    Par biovoyager dans le forum Internet - Réseau - Sécurité générale
    Réponses: 2
    Dernier message: 31/05/2012, 09h50
  2. [Biologie Moléculaire] Primers de qPCR et de RT-qPCR
    Par stonekiller dans le forum Biologie
    Réponses: 4
    Dernier message: 20/05/2011, 10h46
  3. recherche recette savon melt and pour
    Par juppy dans le forum Chimie
    Réponses: 0
    Dernier message: 02/12/2010, 22h48
  4. melt index of polymers
    Par Faisan dans le forum Chimie
    Réponses: 0
    Dernier message: 03/06/2008, 21h50
  5. colle Hot Melt
    Par naouij dans le forum Chimie
    Réponses: 1
    Dernier message: 12/04/2007, 16h41