Primers de qPCR et de RT-qPCR

[invite899b80e1]

Bonjour,
Je voulais savoir si les primers utilisés en RT PCR semi-quantitative sont utilisables pour la PCR quantitative?

Merci bonne journée!
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[Flyingbike]

ca dépend

(il faut voir la longueur de l'amplicon surtout)

[invite899b80e1]

Oui ca je pense bien que c'est la principale limite!
L'analyse in silico prévoi un amplion de 357 pb, et je penses que c'est une taille valable pour la qPCR. A ton avis il y a d'autres paramètres à prendre en compte?
Merci pour ta réponse

[Flyingbike]

357 c'est un peu long mais tu devrais pouvoir adapter le programme. Il faut ajuster aussi la température, mais sinon il ne devrait pas y avoir de problème

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite28f6e6c6]

357pb c'est aussi un peu long pour avoir une efficacité de qPCR proche de 100%.
Pour cela, il faudrait que ton amplicon soit de 200pb max.
Et la température des amorces, est-elle vers 60°C ? En général, on essaye de se mettre à cette température pour pouvoir faire plusieurs couples en meme temps.