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Primers de qPCR et de RT-qPCR



  1. #1
    stonekiller

    Primers de qPCR et de RT-qPCR


    ------

    Bonjour,
    Je voulais savoir si les primers utilisés en RT PCR semi-quantitative sont utilisables pour la PCR quantitative?

    Merci bonne journée!

    -----

  2. Publicité
  3. #2
    Flyingbike
    Modérateur

    Re : Primers de qPCR et de RT-qPCR

    ca dépend

    (il faut voir la longueur de l'amplicon surtout)

  4. #3
    stonekiller

    Re : Primers de qPCR et de RT-qPCR

    Oui ca je pense bien que c'est la principale limite!
    L'analyse in silico prévoi un amplion de 357 pb, et je penses que c'est une taille valable pour la qPCR. A ton avis il y a d'autres paramètres à prendre en compte?
    Merci pour ta réponse

  5. #4
    Flyingbike
    Modérateur

    Re : Primers de qPCR et de RT-qPCR

    357 c'est un peu long mais tu devrais pouvoir adapter le programme. Il faut ajuster aussi la température, mais sinon il ne devrait pas y avoir de problème

  6. A voir en vidéo sur Futura
  7. #5
    sr

    Re : Primers de qPCR et de RT-qPCR

    357pb c'est aussi un peu long pour avoir une efficacité de qPCR proche de 100%.
    Pour cela, il faudrait que ton amplicon soit de 200pb max.
    Et la température des amorces, est-elle vers 60°C ? En général, on essaye de se mettre à cette température pour pouvoir faire plusieurs couples en meme temps.

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