Biochimie: méthode de Western Blot
Bonjours,
Quand je fait une recherche sur internet à propos de la méthode de Western Blot qui sert à identifier et détecter des protéines je trouve qu'il faut réaliser un dosage avec la méthode de Biuret avant la manipulation. Je ne comprend pas pourquoi réaliser ce dosage vu qu'il sert seulement à connaitre la concentration en protéine d'une solution.
Quelqu'un pourrait-il m'éclairée sur ce sujet ? Merci
En fait, doser les protéines avant un Western blot permet de déposer la même quantité de protéines dans chaque et pour chaque échantillon.
En effet, le WB est semi quantitatif : l'intensité de la bande reflète la quantité de ta protéine.
Ainsi, si tu as deux échantillons identiques, mais que tu déposes deux quantités différentes de protéines, les deux bandes auront une intensité différente; Ce qui peut fausser les conclusions (genre : mon echantillon 1 a plus de protéines que le 2, donc le 2 produit plus efficacement).
Cependant, si c'est juste pour s'assurer de la présence (ou l'absence) d'une protéine, il n'y a théoriquement pas besoin de cette étape (même si c'est plus rigoureux de la faire)
Pour finir, je conseille la méthode de Bradford pour doser les protéines (c'est ma préféré)
Merci beaucoup pour votre réponse, cela ma beaucoup aider.
