Transformation/inativation d'un gène

[invite31eac219]

Bonjour,

J'ai un petit soucis de compréhension au niveau de la transformation :
Afin de déléter un gène on peut faire une transformation : ca c'est ok chez les bactéries
Moi je voudrais déléter un gène chez Neurospora Crassa, a savoir un champignon ( je sais que les levures possèdent des plasmides, ce qui rend une transformation classique, style transformation bactérienne possible).
Comment se fait la transformation pour Neurospora Crassa, si on n'a pas de plasmides ???

Merci de me répondre et de m'aider ( je me sens toute bête avec ma question !)
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[invite2ac96057]

ce n'est pas parce que naturellement tu n'as pas de plasmide que tu ne peux pas en insérer.
Chez les cellules de mammifères normales il n'y a pas de plasmide et pourtant tu peux très bien faire de l'expression plasmidique.
Il suffit de sélectionner ta population avec le bon antibiotique... Ou alors je n'ai pas compris la question

[invite31eac219]

Ok, don si j'ai bien compris je construis mon plasmide avec les extrémités du mon gène a déléter, plus un gène de sélection, et après il faut transfecter ce plasmide donc le champignon ?

[invitea142fd95]

Bonsoir,

Oui tu peux transformer par des vecteurs plasmidiques ta levure et la sélection soit sur antibio soit par marqueur d'auxotrophie.

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite31eac219]

Auxotrophie ok, mais antibiotiques sur les champignons ????
Je pensais faire un maqueur avec un antifongique.

Une dernière petite question, est que l'efficacité de transformation va être la même que j'ai les bactéries ( ou est ce que le fait d'être chez des procaryotes va diminuer un peu l'efficacité ?)

Merci beaucoup pour la réponse.

[invite2ac96057]

je n'avais pas compris que c'était pour faire un KO
Dans ce cas tu dois transfecter de l'ADN linéaire, tu fais ta construction et tu linéarises. Si tu as créé une cassette dans ton vecteur bactérien tu purifie après linéarisation. Si tu veux utilisé tout le plasmide en entier je passerai sur gel quand même pour être certain que tu as que de l'ADN linéaire.
Je n'ai jamais transfecté des champignon mais si j'étais toi je ne m'attendrais pas à avoir le même rendement qu'avec les bactéries

[invite31eac219]

Ok merci beaucoup