transformation de bactéries

[invited367fff1]

Bonjour,
Je suis actuellement en stage en Angleterre, je travaille sur les telomeres et j'ai un probleme dans une manipulation pourtant basique :
Je dois inserer dans un plasmide de 7.3kb (pGBKT7) une insert de 1926bp, le probleme est qu'apres ma transformation de bacteries (cellules competentes de E.Coli), je n'obtiens absolument aucunes colonies ...
J'ai 100ng d'insert et 200ng de vecteur, et j'ai realise des ratio de 1/2 et 1/3 mais ca ne fonctionne jamais ...
Si quelqu'un peut m'aider, Merci d'avance !
Lydie
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[Flyingbike]

ça peut être compliqué. Comment sont vos extremités de plasmide et d'insert ?

[invite853321bf]

Bonjour,
Quand vous dites aucune colonie, ça veut dire vraiment aucune ou aucune d'intérêt ?
Comment faites vous votre transformation ?

[invite2ac96057]

Bonjour,

ce qui m'étonne se sont les quantités que tu utilises. Tu utilises moins de d'insert que de vecteur?! je fait l'inverse.
Aussi pour les ratios, il serait aussi judicieux de faire 1/5 voir 1/10.
Mais la question de Kamor est intéressante, as tu que des colonies bleues ou alors pas de colonies du tout???

[A voir en vidéo sur Futura]