Bonjour à tous, j'ai un petit soucis concernant les fragments de restriction. Que j'aie un gène qui soit clivé soit par des enzymes de restriction générant des bouts collants 5' ou 3' sortant, si je mets dans mon milieu réactionnel une DNA polymérase avec des nucléotides amorce etc elle va m'allonger ces 4 fragments sans problème ? ou bien est ce que 3' sortant je n'ai pas de groupement OH donc pas possible d'allonger ?
merci d'avance et bonne soirée
Salut,
Il faudrait que tu dénatures d'abord ton ADN db en sb pour que les amorces s'hybrident en 5' et en 3' de chacun de tes fragments. Si tes amorces contiennent une extrémité 3'OH alors la polymérase devrait pouvoir allonger le brin d'ADN sb formant ainsi un ADN db. C'est le principe d'une PCR. Par contre les extrémités cohésives des fragments peuvent s'hybrider avec un des autres fragments créant ainsi une sorte de fusion. Mais comme le groupement 3' des tes fragments ne contient pas de OH normalement la polymérase seule ne devrait pas pouvoir allonger/compléter les trous de ton brin d'ADN. Car le groupement OH en 3' fournit l'énergie nécessaire pour permettre la liaison des nucléotides incorporés via la polymérase.
