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Correction Dilution en cascade (solution plasmidique)



  1. #1
    dams7325

    Correction Dilution en cascade (solution plasmidique)


    ------

    Bonjour,

    J'ai un tube de 20µL contenant 1µg de plasmide, la concentration est de 0.05µg/µL soit 50ng/µL. Je dois préparer par dilution en cascade 5 solutions contenant (6.25ng, 12.5ng, 25ng, 50ng et 100ng de ce plasmide.
    Donc selon la correction, nous avons préparé une solution à 200ng/µL pour n'effectuer que des dilutions de facteur 2 (c'est ce que j'ai compris en tout cas). Pour préparer cette solution à partir du 50ng/µL, nous avons prélevé 4µL de cette dernière (4*50 = 200ng) et rajouté 16µL d'eau pour avoir un volume de 20µL au total. Quand je calcule la concentration je trouve 10ng.µL ce qui correspond bien à 200ng dans 20µL. Donc l'échantillon total présente 200ng de plasmide. Ensuite on prélève 10µL de solution à 10ng/µL soit 10*10 = 100ng que l'on dilue dans 10µL d'eau (Vt = 20µL) on obtiens une solution de 5ng/µL. On prend 10µL de cette solution soit 10*5 = 50ng de plasmide que l'on ajoute à 10µL d'eau, la nouvelle solution a une concentration de 2.5ng/µL ect...(Est-ce que j'ai bien expliqué le principe? En fait je viens de me rendre compte en écrivant que je confondais les 50ng/µL avec les 50ng dans 20µL ce qui n'est pas du tout la même chose!). Comment savoir que le volume de solution diluée à prélever (en passant de 200ng à 100ng puis de 100ng à 50ng ect) est égal à 10µL? Car pour les 4µL de départ on a une concentration initiale de 50ng/µL mais après je ne vois pas comment prendre le problème à l'envers.
    Merci d'avance.

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    Dernière modification par dams7325 ; 04/10/2013 à 15h18.

  2. #2
    dams7325

    Re : Correction Dilution en cascade (solution plasmidique)

    En fait je l'ai mis dans le texte on prends 10µL car par exemple pour la solution à 10ng/µL on a directement les 100ng de plasmide (10µL * 10ng/µL = 100ng) j'ai compris.

  3. #3
    dams7325

    Re : Correction Dilution en cascade (solution plasmidique)

    En fait je me suis trompé au départ ce n'est pas une solution de 200ng/µL mais une solution contenant 200ng de plasmide. Pourquoi d'ailleurs partons nous de cette solution et pas directement de la solution contenant 100ng de plasmide (ce qui reviendrait à mélanger 2µL de la solution de départ avec 18µL d'eau?)

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