Bonjour,
Je suis entrain de relire mon cours sur la transcription et je voudrais obtenir plus de détail sur la technique qui a été utilisé pour déterminer le sens de transcription. Pour être exacte se sont plutôt des compléments d'explication qu'il me faudrait.
D'après l'explication de mon prof, les scientifiques qui ont trouvé ça ont utilisé des dNTP radio-marqué. De l' ATP (ou GTP) marqué au 32P sur le phosphate alpha et de l'ATP (ou GTP) marqué au 32P sur le phosphate gamma. Le marquage en alpha servant à mesuré une activité globale des brins synthétisé par l'ARNpol (le P alpha étant incorporé au brin d'ARN) alors que le marquage en gamma sert à visualiser le nombre de transcrit (seul le P gamma du premier nucléotide est conservé au cours de la transcription).
Voici ce qui figure sur le ppt que j'ai:
> Incubation du milieu de transcription avec ATP gamma 32P pendant un temps court puis addition ATP non marqué en grande quantité. Analyse du produit synthétisé pour définir l'endroit où est incorporé le 32P.
>Radioactivité importante en 5' de la chaîne
>Conclusion: L'ARN est synthétisé de 5' vers 3'
>Réaction de synthèse in-vitro avec addition lors de la réaction de 3' dATP marqué (alpha 32P)
>Observation de l'incorporation de 32P dans le produit synthétisé
>Conclusion: ARN synthèse 5' vers 3'
J'ai bien comprit l'utilisation du gamma 32P qui a permit de trouvé que sa marqué du coté 5' mais l'utilisation du alpha 32P m'échappe complètement. J'ai tenté vainement de trouver la publication à l'origine de cette découverte. En espérant obtenir de l'aide de votre part. Par avance merci.
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