Bonsoir,
Je cherche a doser d'activité de la Catalase dans un extrait végétal, grâce à la dismutation de H2O2, cependant l'enzymologie est très loin derrière moi. Je veux exprimer le résultat en U/mg de matière.
Voici mes paramètres :
Je broye 0.5g de matière fraiche dans 5ml un tampon d'extraction Phosphate, et je garde le surnageant (5ml)
Voici mes calculs après une cinétique d'une minute :
(dA/m)= epsilon .L.C
L= 1cm et epsilon : 0.4 L.mol-1.cm-1
donc
C=(dA/m)/epsilon = 0,056/0.4 = 0.14 mol/l/min
donc 1l -->0.14
3 ml--> X
(le 3 ml = volume réactionnel (tampon + H202 + 50 µl d'extrait enzymatique)
donc le nombre de mole dans la cuve du spectro = 0.00042 mol/l/min, soit 420 µmol/l (U)
Activité enzymatique totale en U/mg de matière fraiche : activité dans la cuve * Facteur dilution / matière fraiche
Soit 420 * 100 /500 = 84U/mg de matière sèche.
Est-ce que ces calculs sont bons, si non où sont les fautes dans mes calculs ?!
Merci
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