Bonjour à tous,
Je réalise des gels acrylamides (SDS-Page) et j'ai régulièrement des problèmes. Chaque puits à un "sadling effect" et je ne parviens pas à comprendre pourquoi...
Un exemple:
En l’occurrence ce n'est peut-être pas la meilleur photo car il y a aussi un soucis de salinité. Mais le problème qui m'inquiète c'est surtout cette déformation de mes bandes en arc de cercle.
Des idées?
Merci de votre aide
Bonjour,
J'en ai déjà eu des pires, ne t'inquiète pas outre mesure!
Par contre, régler le problème est plus délicat, car il peut y avoir plusieurs raisons...
Dans mon cas, c'était (j'ai arrêter les WB) les électrodes. Elles n'étaient plus droite, mais tordues et faisaient des vagues.
Complètement changer le tampon de migration ainsi que les vieux tubes eppendorfs 50ml avec les vieilles solutions règle le problème.
Le dernier point (et plus difficile à régler) est un problème de protocole, dans le sens ou le down et upper gel ne sont pas coulé/polymérisé correctement. Si le gel down n'est pas entièrement polymérisé avec de mettre le gel up et le peigne, il peut y avoir une déformation. La façon d’aplanir la surface du gel down est également à prendre en compte (utilisation de butanol, bien enlevé?). Dans mon labo, on coulait les deux gels en même temps. On ajoutait simplement du glycérol dans le gel down pour le rendre plus lourd, puis on ajoutait le gel up délicatement par dessus (et on posait le peigne délicatement dessus également). Trop de gel up ne sert à rien.
Bon c'est un peu en vrac, mais cela devrait te donner des idées.
Sinon, ne pas négliger le nettoyage de la cuve et des électrodes! C'est pour cela qu'on les tordait facilement d'ailleurs...
Tiens nous au courant!
J'ai déjà changé le buffer (loading et running) sans résultat.
Je vais chercher du côté de la polymérisation, ça expliquerais pourquoi ça marche bien de temps en temps...
Merci en tout cas!
