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TP fractionnement subcellulaire et enzymes marqueures



  1. #1
    Eagle25

    TP fractionnement subcellulaire et enzymes marqueures

    Bonjour,
    J'ai fait récemment un TP de biologie cellulaire qui a pour objectif de rechercher l'activités d'enzymes marqueurs
    Avant de vous donner mes problème je vais vous donner le protocole du fractionnement :
    On part d'un foie que l'on broie dans une solution tampon (5ml/g de foie)
    On centrifuge une 1ère fois : F1 = 1000 ml et culot : noyau
    2ème fois : F2 = 1000 ml et culot : Mitochondrie repris dans 100 ml = F3
    3ème fois : F3 = on prends seulement 200 ml de F2 pour obtenir le surnageant F5 de 200 ml = cytosol et le culot de microsomes repris dans 40 ml = F4
    En espérant avoir été clair sur le mode d'obtention des différentes fractions
    On a ensuite calculer la quantité de protéines dans chaque fraction par la technique de Lowry
    J'ai obtenu une courbe étalon et donc une équation de type y=ax+b ou y=Absorbance et x=quantité de protéine en µg
    Pour mes fractions elles sont diluées 10X et j'ai fait 3 essais/fractions (10/25/50µl dans un volume final de 150µl)
    Pour connaître la quantité de protéine j'ai fait :
    (A(F1)-b)/a= quantité de protéines dans le tube dilué X10= quantité de protéine dans 25µl de fraction
    dans 25µl => ****µg de protéine donc 25ml => ****mg de protéine
    Pour les fractions F4 et F5 j'ai pris en compte le fait que l'on ne prend que 200ml de F2 donc j'ai multiplié mon résultat par 5
    J'ai trouvé en g de protéine :
    F1: 19,27
    F2: 14,12
    F3: 2,02
    F4: 5,10
    F5: 9,89

    Avant de continuer plus loin je voudrais savoir si je n'ai pas fait d'erreur de calcul et si mes résultats sont cohérent avec la réalité sachant que pour F3 je dois être normalement au alentour de 4 ou 5 g car F1=F2+F3 ce qui n'est pas le cas ici
    Merci de m'aider car j'ai vraiment besoin d'aide et dites moi si je n'ai pas été clair sur certains points
    Merci d'avance

    -----


  2. #2
    Eagle25

    Re : TP fractionnement subcellulaire et enzymes marqueures

    89 vues et pas une réponse?????!!!!
    HELP

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