determiner la localisation subcellulaire d'une proteine végétale
J'ai transformé des protoplastes d'Arabidopsis (PLANTES!!) avec des fusion-GFP avec comme témoin la GFP seule. C'est bien gentil mais comment vraiment savoir où est localisé la protéine car les photos sont pas très clairs.
1) Je pense qu'on peut co-transformer avec d'autres proteines dont on connais la localisation subcellulaire, en la fusionnant avec un autre fluorochrome?
2) Qu'est ce qui est utilisé en routine comme marqueur du noyeau, du cyto, de la membrane plasmique, du RE, des differents organelles etc....
3) qu'est ce qu'il existe comme autres fluorochrome aue la GFP?
4) Qu'est ce que sont les molecules tels que HOECHST, DAPPY? Apparement ça colore le noyeau... est ce que je peux par exemple utiliser ce genre de traitement sur mes protoplats qui expriment aussi ma fusion proteine-GFP? Est-ce que je peux utiliser ce genre de molécule sur des proto vivant? Existe t-il des molecules de ce genre (j'entends, qui ne necessite pas de faire des proteines fusion) pour marquer d'autres choses que le noyeau (membrane, organelle...)
5) et les tecniques d'immunodetection, c'est possible? Dans ce cas la, faut-il que j'utilise des anticorps dirigés contre les marqueurs dont je parle dans la question 1? Qu'est-ce qui ce fait en routine dans ce type d'approche?
Puis-je combiner toutes ces approches en même temps? Merki bcp!!!! J'ai besoin de votre aide...
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Envoyé par katiaestelle 