Purification des organites cellulaires

[invite19c53a73]

Bonjour à tous,
j'ai un projet sur la purification des organites cellulaires et j'ai du mal à cadrer le sujet.
On parle tous d'abord de la lyse cellulaire ayant pour but de récupérer les organites, ensuite l'ultracentrifugation différentielle et sur gradient ( continue ou non ) de saccharose sont abordés.
Faut-il parler de la détection des organites grâce aux anticorps ( biotine - streptovidine ) , d'électrophorèse et de chromatographie , les tris par bille électromagnétique ? Par ceux qu'il me semble que c'est technique ont plus pour objectif de purifier les protéines. Peux-on utiliser la technique des anticorps marqué pour détecter plus spécifiquement un organite et donc obtenir une fraction plus purifié suite à une centrifugation ?
Parce que suite à une centrifufation, il se peut que deux organites de poids moléculaires de poids proche se retrouve dans la même fraction, comment les séparer et avoir une fraction hautement purifié autrement que par marquage grâce à des AC radiomarqué ?
Cordialement
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[Flyingbike]

Faut-il parler de la détection des organites grâce aux anticorps ( biotine - streptovidine ) , d'électrophorèse et de chromatographie , les tris par bille électromagnétique ? Par ceux qu'il me semble que c'est technique ont plus pour objectif de purifier les protéines. Peux-on utiliser la technique des anticorps marqué pour détecter plus spécifiquement un organite et donc obtenir une fraction plus purifié suite à une centrifugation ?

On ne peut pas purifier d'organites par ces techniques, on peut seulement juger de la pureté ou de l'enrichissement d'une fraction en utilisant un marqueur spécifique de l'organite étudié. C'est a posteriori.

il se peut que deux organites de poids moléculaires de poids proche

non ! on parle de densité pour des choses aussi complexes !

Parce que suite à une centrifufation, il se peut que deux organites de poids moléculaires de poids proche se retrouve dans la même fraction, comment les séparer et avoir une fraction hautement purifié autrement que par marquage grâce à des AC radiomarqué ?

Encore une fois je ne pense pas qu'on puisse purifier des organites de cette façon. Ensuite, le degré de pureté dépend de l'intégrité des organites et du pouvoir discriminant de vos étapes de purifications mais elles ont leur limites, a mettre en rapport à ce dont vous avez besoin...