PFA fixation

[invite6c6e1688]

Bonjour à tous,
Encore une fois j'ai besoin de votre aide........Je voudrais savoir ce que fait la PFA dans les cellules pour la fixation. En fait, je suis entrain de tester l'éfficacité de transduction de l'AAV8-GFP dans mes cellules en régardant l'expression de la GFP à 24h et 72h. Le problème est que mes points (24h et 72h) se trouvaient dans une même plaque...et donc, j'ai infecté mes cellules et 24h après je les ai fixées et après j'ai remis la plque à 37°c pour le point "72h". Je suis inquiet par le fait que j'avais remis mes cellules fixées par la PFA pour le point "24h" à 37°c pour attendre le point "72h". Quelqu'un peut il me dire si c'est mauvais ou pas?

N.B: J'avais fait 3 lavages après fixation à la PFA...Normalement après fixation on en censé stockée nos plaques à 4°c pour faire les IF après mais cette fois ci...étant donné que les deux points se trouvaient dans la même plaque et donc j'ai été obligé de remettre la plque à 37°c sans retirer les lamelles des cellules pour le point 24h...


Merci d'avance,
MZB
-----

[invite02e16773]

Salut,

Oui c'est très mauvais

Tu as diminué la durée de vie du filtre de ta hote à flux laminaire. Car comme tu avais des cellules à garder vivantes dans ta plaque, tu as mis ta PFA sous la hote. Ce n'est pas une sorbonne, les filtres sont super sensibles aux vapeurs de produits chimiques.

Si tu as mis de la PFA ou des traces de PFA dans l'incubateur à 37, tu as risqué de perturber toutes les cellules qui sont dedans (y compris celles des autres utilisateurs), et potentiellement de diminuer sa durée de vie aussi.

Si jamais tu n'as pas abimé ta hotte car tu a mis la PFA sur la paillasse, tu as augmenté le risque de contamination.

[invite54839f53]

Salut,

je serais moins catégorique que Guillaume, la PFA en solution (contrairement a la poudre) ne présente quasi aucun risque pour ton PSM (d'ailleurs c'est parce que c'est moin volatil en solution qu'il se sont mis a faire de la PFA toute prête a diluer) (ça épargne les poumons de l'utilisateur)... Perso sur trois différent labo tout les utilisateurs on toujours mis leur solution de PFA dans les cellules sous le PSM...De plus, il a bien préciser qu'il avait rincer ces cellules avant de les remettre a l'incubateur donc rien non plus de ce coté la... La PFA fixe les protéines de tes cellules en creant des liaisons covalentes... c'est assez solide et même si tu a mis tes cellules a 37 plutôt qu'a 4 la dénaturation doit être assez limité... Je te conseille d’essayer tu vas vite savoir après tes immuno si t'arrive a marquer quelque chose mais je pense qu'il n'y aura aucun problèmes (perso j'ai laisser des plaque a 4 °c pendant 6 mois et fait mes marquages après c'etait niquel...)

[invite02e16773]

Je ne pense pas que ça a détruit sa manip (il a juste augmenté les risque de contamination à la rigueur). A mon avis tout va bien marcher.

Pour la PFA sous le PSM, chaque labo a ses habitudes, chez nous je pense que celui qui fait ça passera un mauvais quart d'heure Car la PFA est volatile même en solution même diluée (pour preuve : l'odeur qui envahi rapidement un labo si tu laisses une plaque ouverte un peu trop longtemps).

En théorie, il faudrait tout faire sous sorbonne... En pratique, quand c'est rapide on fait sur la paillasse mais c'est mal

[A voir en vidéo sur Futura]