Immunomarquage de la rétine du macaque

[invite1037bcf3]

Bonjour,
J'ai des question concernant l'immunomarquage des protéines dans la rétine du mcaque:

ma première question est: Pourquoi le macaque et pas la souris ou un autre mammifère?

pendant l'immunomarquage nous utilisons des bain dans du sérum de chèvre, puis dans de l' albumine de sérum bovin (c'est quoi le rôle de chaque sérum?)

puis on utilise un anticorps polyclonal anti la protéine d'interet , on rince et on met l'anticorps secondaire anti- anticorps de lapin, marqué par un marqueur fluorescent, dilué dans du PBS contenant 1% d'albumine de sérum bovin pendant 1h à température ambiante .

C'est quoi l'interet dsu serum bovin à la fin aussi

en gros je n'ai pas trop compris la technique d'immunomarquage

Merci pour votre aiiide
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[invitee4e79868]

Bonjour,

Je ne peux pas répondre à la première question. Mais j'imagine que c'est un exercice, les expériences sur les grands singes étant maintenant extrêmement difficile à réaliser (heureusement).
Les sérums d'autres espèces sont utilisé pour bloquer les sites non spécifiques. Le SVF (Sérum de Veau Fœtale) est le plus commun. Il est également possible d'utiliser le sérum d'autre espèce dont on utilise l'anticorps.
Un exemple est plus pratique :
On dispose de la coupe, et on la sature avec une solution de blocage comportant entre autre du sérum de bovin.
On rince, puis on ajoute à cette même solution notre anticorps dirigé contre notre cible. Cet anticorps est issu de la chèvre.
On rince de nouveau, puis on (peut, c'est pas toujours réalisé, cela dépend des expériences) saturer les sites de réaction de l'anticorps de chèvre avec un sérum de chèvre.
On rince de nouveau, puis anticorps secondaire anti-IgG de chèvre (provenant du lapin cette fois). Vu que celui ci marque la fin des réactions, pas besoin de saturer après avec un sérum de lapin.

Bref, ces étapes de saturation permettent de s'assurer que les sites non spécifiques sur la lamelle ne vont pas être détectés par notre anticorps (cela serai ennuyeux). On les "recouvre" donc avec une protéine "bidon", l'albumine contenu dans le sérum.

[invite1037bcf3]

Merci pour l'explication.

Malheureusement les expériences sur les singes continuent à être réalisée
l'exemple de cet article récent (Localization of Usher 1 proteins to the photoreceptor calyceal processes, which are absent from mice.)
en gros je me réponds à moi même pour la première question (puisque je n'étais pas claire) , donc ça depend des protéines étudiées selon qu'elles soient presentent chez la souris

Merci

[invitee4e79868]

La législation en Europe a évolué, et les expériences sur les grands singes sont maintenant strictement encadrées et restreintes (à l'étude ou la recherche de maladie dont on n'a pas le choix du modèle). Mais les grands singes sont les gorilles, les chimpanzés communs ou bonobos, les orangs-outans (et l'Homme...). Le macaque, ouistiti et autre petits singes n'en font pas parti. Mon erreur, ça...

Sinon, tout compris pour l'utilisation de sérum?

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite1037bcf3]

Ouii...Merci