Article HPLC en phase inverse

[invite010220e8]

Bonjour à tous amis biologistes/biochimistes !!

J'ai un commentaire de publication à rendre pour lundi matin dans laquelle il y a une extraction et une purification d'un peptide d'un venin de vipère. Et dans cette étude ils font une HPLC en phase inverse mais j'ai du mal à comprendre pourquoi en phase inverse, dans la mesure où l'on cherche à caractériser quelque chose dont on ne connait donc pas les propriétés d'hydrophobicité..

Etant une phase inverse je peux supposer que la molécule à purifier est donc polaire c'est bien ça? Je précise que c'est une HPLC en gradient d'acétonitrile et d'eau.
Si vous pouviez m'aider SVP je me creuse depuis hier et j'arrive pas à trouver dans la biblio...

Je vous en serais éternellement reconnaissant
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[inviteb6144ea4]

Bonjour,

phase inverse signifie seulement que la phase stationnaire est apolaire (généralement gel de silice sur lequel des groupements alkyles sont fixés).
La phase mobile est alors polaire (dans ton cas gradient eau+acétonitrile).
Les molécules hydrophiles seront donc éluées en premier.
On dit que la phase inverse n'évolue pas au cours du temps, ce qui permet une séparation de qualité constante.

Cordialement

M.

[sfnsfn2]

le choix de la phase stationnaire (mode de chromatographie) dépend de la nature de la molécule à analyser, ils sont de meme nature pour qu'il y a une rétention

[invite010220e8]

Je vous remercie infiniment de vos réponses mais le fait est que dans la publication il n'est pas précisé la nature de l'élément à séparer, j'ai l'impression que c'est un peu à l'aveugle ce qu'ils font.. C'est bizarre quand même !

[A voir en vidéo sur Futura]

[vpharmaco]

Les peptides sont des molécules globalement très polaires. Ils sont quasi indécrochables d'une phase normale, sauf à utiliser des éluants infames.
C'est pour cela que dans la très grande majorité des cas, leur purif se fait en phase inverse.

[invite010220e8]

Aaah ok ! Merci vpharmaco ! Ça m'a l'air quand même bien pratique cette phase inverse quand je fais le tour de quelques publis ! :