Manipulation de l'ADN: plasmide
Bonjour,
je suis actuellement en première année de licence en biologie et nous avons étudié les plasmides mais je n'ai pas tout compris notamment sur la carte de réstrction. Quelle est son principe? et qu'est ce qu'un site de réstrction, une origine de réplication, un promoteur et un terminateur ?
Merci d'avance.
Bonjour,
Les plasmides utilisés en recherche sont souvent des plasmides très modifiés par les sociétés qui les vendent. Afin de pouvoir insérer facilement des portions d'ADN d'intérêt dans le plasmide, on a prit l'habitude de placer des sites de restriction. C'est à dire des sites reconnus par des enzymes capables de couper l'ADN.
L'avantage de ces enzymes est qu'ils coupent des séquences en acide aminés très spécifiques et forment (souvent) ce qu'on appelle des bouts collants (ils ne coupent pas les doubles-brins nets mais laisse dépasser un des deux brins). L'intérêt de ceci est qu'un bout collant généré par une enzyme de restriction aura tendance à s'attacher à un bout collant généré par la même enzyme.
L'intérêt est de couper ET notre morceau d'ADN d'intérêt ET le plasmide avec le MÊME enzyme de restriction. Ainsi lorsqu'on les mets en présence l'un de l'autre, ils auront tendance à s'attacher et nous permettre de refermer le plasmide nouvellement constitué.
Le plasmide étant constitué d'ADN tu as besoin d'une origine de réplication afin de permettre aux polymérases de le reproduire dans la bactérie. Si le morceau d'ADN ajouté code pour une protéine, la présence d'un promoteur et d'un terminateur te permettra d'activer la production de la protéine à partir du plasmide
