Congélation de cellules de levures

[invite537c5180]

Bonjour,

J´utilise depuis peu des cellules de levures de type Saccharomyces cerevisiae (AH109), et pour les congelés j´utilise 12% de DMSO (comme je le fait pour mes bactéries: E. coli et Caulobacter crescentus), mais voila, il y a quelque temps des personnes m´ont dit que pour congéler des cellules de levures, il fallait mieux utiliser du glycérol, est-ce vrai ? Si oui, à quelle concentration ?. Je tiens à préciser que lorsque je les décongélent (congélation au DMSO) elles ont beaucoup de mal à redémarré (près de 48h pour avoir une DO de 1 dans un milieu riche YPAD ), est-ce que vous pensez que cela est du à la congélation au DMSO ?
M E R C I
-----

[TanguyE]

Bonjour,

Je ne suis pas un expert en levures, mais je trouve que 12% de DMSO ça fait beaucoup. Je sais que dans mes cellules de mammifères, je met pas plus de 5%. J'utilise 20% de glycerol pour mes E. coli, ça fonctionne très bien.

L'ATCC dit ceci sur la conservation des levures:

Freeze dried vials of yeast can be stored at 4°C for several years. Yeasts received as frozen glycerol stocks should be stored at -80°C or liquid nitrogen (best), and should remain viable for a long period of time. Please note though that ATCC's replacement policy only warrants replacements on vials for 30 days after receipt, so we recommend that the cultures be started before that period is up.

Once the culture has been expanded, most yeasts can be maintained on agar and kept at 4°C for about a week. For long-term storage, aliquots can be frozen for future use. ATCC suspends cells of a fresh culture directly from the agar into 10% glycerol in water (or other suitable cryopreservative, such as 5% DMSO) and dispenses 0.5 ml of the suspension into 1 ml plastic screw-capped cryovials. The vials are then frozen at the rate of 1°C per minute to -40°C, and then cooled 10°C per minute to -90°C. The vials are then transferred to the vapor phase of a liquid nitrogen.

Most yeasts will also survive an uncontrolled freeze by just placing the filled vials directly into a mechanical freezer at -55 to -60°C for at least an hour. Vials can then be transferred to the vapor phase liquid nitrogen.

Pour ce qui est de cette question:

Je tiens à préciser que lorsque je les décongélent (congélation au DMSO) elles ont beaucoup de mal à redémarré (près de 48h pour avoir une DO de 1 dans un milieu riche YPAD ), est-ce que vous pensez que cela est du à la congélation au DMSO ?

Difficile à dire si tu n'a pas d'élément de comparaison. La seule chose, c'est que le DMSO est ultra toxique donc il faut s'en débarrasser très rapidement après décongélation.

[invite537c5180]

Ok, Merci pour l´info TanguyE