Ajuster la concentration d'ADN

[invite145a38db]

Bonjour à tous,

Je me tourne vers vous car mes recherches n'ont conduit qu'à des définitions théoriques, qui ne me satisfont pas.
Voilà j'ai fais une extraction d'ADN (champignons), après quantification, j'ai obtenu des concetrations différentes. comme j'ai de nombreux marqueurs à faire passer, j'aimerais ajuster mes concentration d'ADN pour ne pas avoir d'empatement lors de la révélation des produits de ma PCR (comme c'est déja arrivé).

Je sais que ça reviens à faire des dilution et des aliquotes, or je n'ai pas de base en biomol, je débute juste et c'est tout nouveau.

Merci par avance
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[invitecde43c52]

Quel est le problème si tu sais qu'il faut faire une dilution ?

[invite145a38db]

Merci pour votre réponse. Bein justement, je ne sais pas faire de dilutions, j'ai précisé que je n'avais pas de base en biomol et que c'était tout nouveau pour moi.

Merci ☺

[biseibutsu]

Bonjour,

Dans ce cas; le mieux est d'utiliser la formule magique qui fonctionne presque toujours :
Ci*Vi=Cf*Vf (adaptable à d'autre situation également)
Où Ci est la concentration initiale, que tu dois connaitre (mesurer au nanodrop par exemple). Vi est l'inconnu, c'est le volume que tu dois prendre pour réaliser ta dilution.
Cf est la concentration finale, c'est toi qui dois la fixer. Pour l'ADN, le plus pratique si c'est possible est de fixer à 1gamma, soit 1mg/ml (ou ug/ul, c'est la même chose...). Mais c'est toi qui choisis... Vf est le volume final de la réaction, c'est encore toi qui choisit. Il faut juste que ce soit pratique à faire, pas trop grand ou pas trop petit. Bref, cela dépend de l'utilisation. Pour un dépôt sur gel, 10 ou 20ul, c'est bien...

Exemple :
Trois produits d'ADN
A : 3.42ug/ul
B : 5.51ug/ul
C : 2.10ug/ul
Vf désiré : 20ul, concentration final Cf : 1ug/ul
Vi=(Cf*Vf)/Ci
Donc pour A : Vi=(1*20)/3.42
A : Vi=5.85ul
Il faudra donc prélever 5.82ul de la solution A pour les mettre dans un volume final de 20ul (donc rajouter 14.18ul d'H2O). Et voilà, une solution A à 1ug/ul!

Je te laisse faire les deux autres exemples

Attention comme même à ce que toute les unités soit normalisé (identique). Je veux dire par là que si tu ne peux pas faire ce calcul si tu as une concentration en ng/ul (Ci) et la Cf en ug/ul. Il faut uniformiser.

Réponse :
B : Ci=3.63ul + 16.37ul H2O
C : Ci=9.52ul + 10.48ul H2O

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite145a38db]

Bonjour Bisibutsu,
Un grand merci pour ta réponse aussi claire que précise, Merci d'avoir pris le temps de me répondre...tu m'enlève une grosse grosse épine du pied..merci, merci, merci.......