Microbiologie

[invite507bf45e]

Bonsoir j'ai un un TP de microbiologie à préparer, il traite de la préparation des milieux de culture.
Je vous montre l'énoncé :

Un milieu de culture a la composition suivante :

KH2PO4 ==> 7.0g
MgSO4 ==> 05g
FeSO4 ==> 0.2g
(NH4)2SO4 ==> 5.0g
Glucose ==> 4.0g
Agar ==> 15g
Ampicilline ==> 15g
H20 ==> 1L



Pur réaliser ce milieu on dispose d'une solution non stérile de MgSO4 à 10%, de (NH4)2SO4 à 25%, d'ampicilline 1000X et d'une solution de glucose stérile 1.5M(MM=180)
Les autres composés sont disponibles sous la forme solide.

1) Quel est le rôle de chacun des constituants = FAIT
2) Quelle quantité de chacun des constituants vous faudra-t-il pour préparer 750mL de milieu liquide ?


C'est la que je "beug".
Je vous explique mon raisonnement:
Pour MgSO4 à 10% ce qui signifie que dans une solution de 100ml on a 10g.
Donc là si on veut 0.5g, il faut mettre 5 mL.
Or on veut 750 millilitre de solution, je pensais multiplier par 7.5. Et donc dire : il faut mettre 37,5ml de solution ?? Est-ce bon ? J'en doute pour 2 raisons :1)je ne suis pas sur de mon raisonnement
2) dans l'énoncé il parle de mettre 1L d'eau donc je ne sais pas si les quantité qu'on me donne sont pour 1L. j'explique; je me demande si par ex les 0.5g de MgSO4 ne sont pas pour 1L et donc dans ma solution de 750 ml je n'en aurait besoin que de 3/4 des 0.5g soit 0.375g ??

Pouvez vous m'expliquer ? s'il vous plait. Et également pour l'ampicilline 1000X, cela veut dire 1000 fois concentré mais je ne cerne pas le raisonnement.

3) Quelle procédure allez-vous suivre pour stériliser le milieu de culture ?
Je pensais tous simplement a 20min d'autoclave ?



Excusez-moi pour le dérangement
Mariidiotee.
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[noir_ecaille]

Ce n'est pas "1L" d'eau, c'est qsp (= quantité suffisante pour) 1L d'eau ==> on rajoute de l'eau distillée jusqu'à arriver à 1L de solution totale pour la composition de référence

C'est plus pratique d'écrire la composition de référence pour 1L : ça facilite les conversions de quantités -- par rapport à si elle avait par exemple été donnée pour 0,672E^-6 m³, non ?

Actuellement, il vous manque un calcul intermédiaire avant de calculer ce que vous aller prélever de vos solutions d'ingrédients.

[invite507bf45e]

Merci de votre réponse !
J'avoue ne pas avoir fait attention a qsp

Donc cela veut dire que le début de mon premier raisonnement est correct ? Pouvez vous m'expliquer ce qui manque comme calcul intermédiaire ?

[noir_ecaille]

Puisqu'on vous donne les quantités pour 1L, il faut au préalable les convertir pour 750 mL.

Sinon ça va être trop concentré quand vous ferez votre niveau à 750 mL en ayant par exemple prélevé 5mL de MgSO₄ à 10%.

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite507bf45e]

Merci beaucoup pour votre réponse

Donc pour 750, j'ai besoin de 0.375g et non de 0.5g.
Donc j'ai besoin de 3,75mL de solution de MgSO4 pour avoir 0.375g dans 100ml de solution.
Or on en veut 750ml; donc je multiplie 3.75*7.5 et je trouve 28,125mL.

Est-ce cela ?
SI oui ensuite je fais la même chose avec NH4, et pour le glucose j'utilise n=C*V, de ec coté là pas de soucis.

Mais pour ampicilline 1000X pouvez-vous m'expliquer ce que signifie 1000X ?
Il me faut 0.1g d'ampicilline pour 1000ml, donc 0.075g pour 750mL.
et ensuite que dois-je faire ?

[noir_ecaille]

Hou-là, stop. C'est tout mélangé


Vous venez de calculer la quantité/masse nécessaire pour 0,75 L de solution -- soit 0.375g de MgSO₄. Pourquoi voudriez-vous multiplier votre volume cible et votre quantité cible ensemble ? J'ai l'impression que vous êtes tellement pressé d'arriver à l'ampiciline que vous vous embrouillez dans les volumes...


Avec des lettres, des fois ça passe mieux. Pour MgSO₄, soient :
V_ref = 1L
m_ref = 0,5g
V_cible = 0,75 L
m_cible = ?

Soit q la concentration massique à obtenir. On sait que :
q = m_ref / V_ref

Donc puisqu'on a la même concentration massique pour notre volume cible, on a aussi :
q = m_cible / V_cible

Par équivalence de concentration massique, ça donne :
m_cible / V_cible = m_ref / V_ref
m_cible = m_ref * V_cible / V_ref


Concernant notre prélèvement de MgSO₄, soit :
q_réactif = 10% = 100g/L
V_réactif = ?

Par équivalence, on veut dans notre pipette de prélèvement :
m_cible / V_réactif = q_réactif

On connaît la masse m_cible par calcul, et la concentration massique du réactif (donc du prélèvement de réactif dans notre pipette) nous est donnée, donc on cherche le volume de réactif à prélever, soit :
V_réactif = m_cible / q_réactif


Est-ce que c'est plus facile à suivre comme ça ?



Concernant le glucose, pourriez-vous me dire ce que serait n, C et V ainsi que leurs valeurs (avec les unités) ?

[invite507bf45e]

BONJOUURR !

D'accord, j'ai pris mon temps pour comprendre votre raisonnement.
La première partie = OK, j'avais voulu faire plus simple en me disant 0.75L = 3/4 de 1L donc 0.5g (3/4) = 0.375g pour 750mL. Mais votre raisonnement est surement plus scientifique que le mien

j'ai utilisé vos formules, et donc a la fin en utilisant:

mcible/vréactif = qréactif <===> vréactif = mcible/qréactif = 0.375/100= 0.00375mL

Très bien maintenant j'ai une question, je comprend les calculs mais j'ai un pb de "logique dans ma tête", voilà je pensais que 10% voulais dire que si je mettais 100ml d'un réactif enfaîte sur ces 100 il n'y en aurait que 10mL qui serait du "vrai produit" ici MgSO4 pure ( le reste un solvant p-e), et donc je pensais que si je voulais avoir 0.375g, il fallait que je mette 10 fois plus de produit soit 3.75mL pour avoir cette quantité. Or ici je dois en mettre 100 fois moins?
Comprenez-vous ma question ?


Je me met au Glucose dès mnt

[invite507bf45e]

En ce qui concerne le glucose :
n=C*V

On cherche ici le volume
V=n/C <===> V=m/M*C

avec
V= volume de glucose a prélever = ?
M= masse molaire = 180 g.mol-1
m = 3g (4g pour 1L = 3g pour 750mL)

Donc V = 3/180*1.5 = 0.111111 =1/90 !
Voilàààà

[noir_ecaille]

Attention aux unités !

Je ne l'ai pas précisé mais on peut aussi simplifier le calcul, le rendre en une seule étape.

En effet, dans :
Vréactif = mcible / qréactif
On peut remplacer m_cible, sachant que :
m_cible = m_ref * V_cible / V_ref
Soit :
Vréactif = m_ref * V_cible / V_ref / qréactif
Vréactif = m_ref * V_cible / (V_ref * qréactif)


Maintenant les unités :

m_ref est en g
qréactif en g/L
Vréactif, V_cible et V_ref sont en L !

Or vous écrivez :

mcible/vréactif = qréactif <===> vréactif = mcible/qréactif = 0.375/100= 0.00375mL

C'est dommage de faire des erreurs sur les unités, parce que ça modifie les résultats d'un facteur de 10^-3, et donc ça fausse la composition de votre milieu



Pour le glucose, c'est un petit peu mieux mais...

Vous avez oublié de définir C (en mol/L) qui est donné dans l'énoncé. Et pas que, on va le voir

Essayez quand même de toujours de nommer la masse de référence et la masse cible. Là on n'avait que deux masses, mais imaginez si vous en aviez eu plus ? À force ça finit facilement par s'emmêler les pinceaux -- comme pour les volumes du MgSO₄. Ça paraît peut-être long mais la rigueur est essentiele pour éviter de se tromper dans les calculs -- et on traduit tout en unités internationales (si nécessaire avec des puissance de 10).

Donc bien posé on a...

La formule générale des concentrations molaires :

n=C*V

ou encore :

V=n/C

ou encore :

V=m/(M*C)

Attention aux parenthèses, surtout si vous tapez le calcul dans une machine.

Sauf que...

V= volume de glucose a prélever = ?

Et paf Vous avez oublié de nommer vos volumes (il n'y en a pas qu'un), masses et concentrations, et c'est risquer de se perdre comme à vos débuts.

Reprenons...

Soient :
m_référence = 4g
V_référence = 1L
V_cible = 0,75 L
m_cible = m_ref * V_cible / V_ref = 4 * 0,75 / 1 = 3g soit votre caclcul, mais pour la démonstration et la rigueur, on nomme les termes de l'équation
C_réactif = 1,5 mol/L la concentration molaire du réactif (NB : c'est énorme... j'ai vérifié, ça fait même 270g/L de glucose)
M_réactif = 180 g/mol pour le glucose
V_réactif = ? L

On sait que :

• m_cible = n_réactif * M_réactif
• C_réactif = n_réactif / V_réactif

D'où :

• n_réactif = m_cible / M_réactif
• V_réactif = n_réactif / C_réactif

D'où :
V_réactif = m_cible / M_réactif / C_réactif
V_réactif = m_cible / (M_réactif * C_réactif)
V_réactif = 0,3 / (180 * 1,5)
V_réactif ≈ 1,11*10^-3 L



Pour l'ampiciline, ça fait trop longtemps que j'ai vu cette "unité", et j'avoue ma difficulté à retrouver ce que c'est (UI ? UI/L ? autre ?) Donc dans le doute, je préfère passer la main à un autre intervenant, à moins que dans tes cours ou auprès d'autres élèves ou de ton prof, tu n'arrives à dénicher ce que c'est ^^;