Manque de fiabilité crible Blanc-Bleu

[Costeee]

Salut tout le monde !

Je suis en L1 Bio et doit faire un CR de TP sur un clonage de fragments d'ADN du phage Lambda par le plasmide pBluescript.
Pour différencier les bactéries recombinantes avec / sans insert on a fait un crible blanc-bleu.
J'ai compris le principe théorique de ce crible mais j'ai entendu dire qu'il y avait quand même un manque de fiabilité non-négligeable avec des faux-positifs et faux-négatifs.
J'aimerais juste savoir si vous avez des explications à ça.

J'en ai trouvé deux pour l'instant :
- Faux-positifs explicables par une mauvaise synthèse de la B-Galactosidase (?)
- Faux-négatifs dus à un décalage du cadre de lecture qui a donc pas empêché la synthèse de la B-Galactosidase (?)

Merci de rajouter des raisons si vous en connaissez !
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[Yoyo]

Salut

En effet lors de la ligation l'ADN peut être abimé ce qui crée un décalage et donc des clones blancs.
De manière identique, l'enzyme de restriction peut aussi abimer l'extrémité de l'ADN.
Enfin il y a aussi des faux négatifs, c'est à dire des clones bleus qui peuvent contenir l'insert car cet insert n'empeche pas la synthèse de la b-gal.

YOyo