Bonjour à tous,
J'aurais aimé savoir vers quelle type de techniques vous orienteriez-vous (en terme d'optimisation de temps de manip et de couts financier) si vous aviez à quantifier un peptide (40 acides aminés environs) sur 1000 échantillons différents svp? Le peptide n'a pas besoin d'être utilisé dans d'autres expériences ensuite, et peut donc être dénaturé.
Merci d'avance pour vos conseils,
Bonne journée.
L'echantillon est-il complexe? Le peptide a-t-il quelque chose de particulier? Est-il présent naturellement dans l'extrait ou a-t-il été introduit?
A priori, sans plus d'information, je passerais chaque échantillon en LC-MS en espérant qu'il ne soit pas noyé sous une multitude de produits. En temps "personne", ce n'est pas trop lourd. En temps "machine", cela peut être long.
pourquoi pas en elisa ? ça doit même pouvoir se faire en 384 puits
SAlut
La spectrométrie de masse n'étant pas quantitative, j’opterai plus pour l'ELISA comme le propose Flyingbike.
Yoyo
Super pour l'ELISA, en effet je n'y avait pas pensé n'ayant jamais fait d'ELISA quantitatif, merci à vous pour vos réponses!
Petite question du coup, mes dosages sont à faire idéalement sur des cultures bactériennes brutes, pour infos ce sont des souches transformées avec différents vecteurs produisant le même peptide mais en quantité différente, et avec plusieurs domaines en plus ou en moins.
Concernant la lyse, ce serait plus simple que j'utilise une lyse thermique (notre appareil de sonication est pourrav et ne peut faire qu'un échantillon à la fois, on ne pourra jamais lyser les 1000 cultures comme ça ...), mais cela ne risque t-il pas de changer la structure de l'épitope et donc l'affinité de l'anticorps?
Effectuer un dosage ELISA sur un un lysat cellulaire brut ne pose pas de pb? (après avoir vérifié la spécificité de l'Ac)
Merci encore pour vos réponses
Bon week end à tous
Bonjour,
La spectrométrie de masse peut être quantitative en utilisant un peptide AQUA qui sert d'étalon interne !
Bonnes fêtes
