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besoin d info sur la transfo des levure au PEG



  1. #1
    junitodelvolo

    besoin d info sur la transfo des levure au PEG

    Bonjour tous le monde, je en BTS anabiotech, et la j'aurai besoin que quelqu un m explique clairement le principe de la transformation des levures par choc thermique avec le PEG et le acétate de lithium (en vue de réalisé un double hybride).

    Voila l info qu on m a donné:

    L’introduction des vecteurs recombinants dans la levure Saccharomyces cerevisiae Y190 se fait transformation au PEG.
    Les levures dépourvues de paroi, sont incubées en présence d’ADN plasmidique recombinant, de poly éthylène glycol (PEG) et de chlorure de calcium. D’autre part, des cellules intactes (avec une paroi), sont traitées par une solution saline alcaline d’acétate de lithium qui a pour effet de fragiliser les membranes, puis incubées avec l’ADN plasmidique et le PEG. La pénétration de l’ADN dans les levures ainsi traitées est stimulée par choc thermique. L’ADN étranger peut être maintenu dans la cellule transformée sous une forme intégrée à l’ADN chromosomique par recombinaison homologue ou bien sous une forme réplicative indépendante du chromosome.

    bilan je comprend pas pourquoi ya de type de levure, et pourquoi y a n'a sans paroi alors que le PEG agit dessus

    merci d avance

    -----


  2. #2
    Zool

    Re : besoin d info sur la transfo des levure au PEG

    Salut junito.
    Les levures possedent une paroie pour maintenir leur forme, on fait souvent des digestions des paroies des levures pour des manips tels que extraction adn genomique ou dans les techniques de microscopie. Ca depend donc si tu digere ta paroie avant des transformer tes levures ce que je ne fait jamais (les enzymes necessaires a la degradation de la paroie sont cheres). L acetate de Lithium agit en permeabilisant la menbrane afin de faciliter l entree du plasmide. Le plasmide est melangé avec un ADN entraineur (carrier) qui facilite egalement l entree du plasmide. Les Peg par sa viscosite garde les cellules encontact avec l adn et facilite l adsorption. Le choc thermique entraine l entree du plawsmide dans la cellule. Certains marqueurs de selction sur les plasmides necessitent un temps de recuperation avant de les etaler sur milieux selectifs . Voila j espere que ca a pu t aider
    A++

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