Bonjour
j'ai réalisé une hybridation moléculaire avec des sonde 16S et des sonde spécifiques d'un gène avec les fragments d'ADN d'une souche bactérienne.Le profil d'hybridation avec la sonde spécifique du gène m'a donné une seule bande de taille 2 megabases . Mon prof ma dit qu'elle correspond à un mini-chromosome.
Donc ma question ,c'est quoi la différence d'un mini chromosome ou le chromosome bactérien ? ça pourrait être un plasmide?
merci de me clarifier
Bonjour,
Il n'existe que deux types de génome bactérien : le génome viral (ADN circulaire sauf exception) et le génome "plasmidique".
Lors de la conjugaison entre deux bactéries, il se peut que si la partie du génome viral de la cellule donneuse qui ai été transféré dans la cellule receveuse possède des sites de liaisons à l'ADN de cette dernière, les deux séquences d'ADN s'échangent. L'ADN viral de la bactérie receveuse qui ne se trouve plus sur le génome de celle-ci va être vite dégradé. Ceci peut conférer de petites bandes supplémentaires malgré le fait qu'il est en général très vite dégradé. Pour ma part, je doute fortement qu'il s'agisse de ça.
Après, y'a t'il eu ajout d'enzymes de restriction dans le milieu ? ceci pourrai expliquer le petit fragment.
Pour hybrider des sondes, il a fallu que tu mette un produit pour perforer les membranes afin de laisser passer ta sonde non ? Si tel est le cas, peut être que cette étape n'a pas fonctionné et que ta sonde à hybridé un bout d'ADN d'une bactérie lysée.
"ici se trouve le chemin, c’est ici que commence notre Grand Voyage."
Oui j'ai utilisé l'enzyme I-CeuI .Mais vous considérez que la taille :2 megabases : correspond à un PETIT fragment???
.En fait y'a pas eu de conjugaison,j'ai réalisé une digestion d'ADN avec cette enzyme et une migration PFGE ,ensuite j'ai hybridé mes fragments avec les sondes.
je suis désolée mais j'ai pas compris la définition exacte d'un mini chromosome !!.est -il toujours présent dans le génome ? et pourquoi on considére pas que cette bande correspond à un plasmide par exemple ?
merci
Bonsoir,
Je me permets de répondre et j’espère aider un peu.
Un minichromosome, par définition c'est un petit chromosome: avec les télomères, un centromère, une origine de réplication, et quelques pseudogènes (éventuellement des gènes peut-être) mais qui est plus petit que les chromosomes présents dans l'espèce, et capables de ségrégé correctement. Il peut y en avoir un grand nombre, chez Trypanosoma brucei par exemple il y en a un peu plus d'une centaine. Il semble qu'ils soient dus à des erreurs chromosomiques.
Pour un peu de lecture:
Murata, Minichromosomes and artificial chromosomes in Arabidopsis, Chromosome research. 2014
Eliason et Nordstrom, Replication of minichromosomes in a host in which chromosome replication is random, Molecular microbiology. 1997
Ersfeld et Gull, Partitioning of large and minichromosomes in Trypanosoma brucei, Science. 1997
merci pour votre réponse
