Technique d'hybridation

[invite4ff68f9b]

Bonjour,

Quel est le nom svp de la technique qui utilise l'hybridation d'une sonde d'ADN monocaténaire sur des ARNm séparés par électrophorèse?
Est-ce la transcriptase inverse ou je suis à côté de la plaque? Merci.
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[Didie13]

En espérant ne pas te dire de bétises, il y a une technique qui s'apelle l'extension d'amorce (elle permet notamment de retrouver les +1 de transcription)

Tu as ton ARN, tu lui hybrides une amorce ADN (qui peut-être une sonde marquée visualisable sur Northern Blot) et à l'aide d'une ADN polymérase ARN dépendante, tu produis un ADN complémentaire de cet ARN. Donc oui tu peux appeler ça une réaction de transcription inverse je pense.

J'espère que quelqu'un te confirmera (ou pas) ce que j'avance.

En attendant, lis ceci, ca pourra peut-être t'aider:
"On peut volontairement synthétiser un brin d'ADN à partir d'un ARN en particulier de l'ARNm eucaryotique de façon à avoir un brin d'ADNc (ADN complémentaire) que l'on peut introduire dans un vecteur en vue d'un clonage. Cet ADNc une fois traduit dans des cellules procaryotiques donne un ARNm sans introns qui peut être traduit sans trops de problèmes. Ces ADNc peuvent aussi servir de sondes radioactive (Northern ou Southern) pour détecter, voir doser un ARNm correspondant."
Source: http://pagesperso-orange.fr/vincent....h/revtrans.htm

[invite001d072d]

Je pense qu'il pourrait s'agir de la transcription inverse cependant un détail m'intrigue : l'hybridation de la sonde d'ADN monocaténaire sur des ARNm séparés par électrophorèse. La transcription inverse s'effectue dans un tube sans que les ARN aient été séparés auparavant. Ce n'est qu'une fois que la transcription inverse est faite que l'on réalise une PCR pour amplifier l'ADN complémentaire qui nous interesse. Ce sont donc les produits de PCR qui sont visualisés par électrophorèse.

Si les ARNm sont d'abord séparés par éléctrophorèse et qu'on utilise une sonde ADN marqués monocaténaire, il s'agit alors d'un northern blot qui permet de détecter un ARNm parmi les autres sans réaction de transcription inverse derrière. Northern blot et transcription inverse ne se réalise jamais en même temps. Je pense d'après ta question qu'il s'agit du Northern Blot que pratiquement plus personne n'utilise aujourd'hui car d'autres techniques moins dangereuses que la radioactivité ont vu le jour : la RT-PCR en temps réel qui elle fait appel à de la fluorescence toute bête.

J'espère avoir répondu à ta question...

[jmbowie]

Bonjour,

Quel est le nom svp de la technique qui utilise l'hybridation d'une sonde d'ADN monocaténaire sur des ARNm séparés par électrophorèse?
Est-ce la transcriptase inverse ou je suis à côté de la plaque? Merci.

Northern Blot

La transcriptase inverse est une enzyme catalysant la conversion d'ARNm en ADNc.

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite2769cbb0]

tout à fait d'accord avec toi jmbowie
je pense que cette technique est le northern blot c'est à dire le transfert d'ARN sur membrane de nitrocelluloseou nylon à partir d'un gel d"agarose, par capillarité suivie d'une étape d'hybridation à ADN complémentaire et c'est là qu'intervient la reverse transcriptase car c'est une enzyme qui permet à partir d'un ARN d'obtenir un ADN complémentaire