Coloration gram : Resoudre le probleme

[aurore268]

Bonsoir ,
Je doit resoudre un probleme en microbiologie. Notre professeur veut qu´on fasse appelle a la logique pour le resoudre.
Dans la matiere nous avons vue et appliquer la coloration gram , rien de plus.
Voici la question :


Au cours d´une coloration Gram , en lieu et place du cristal violet et de la safranine , on utilise du bleu de méthylène (bleu roi ) et du vert de malachite (vert d´eau ). Le mordant n´est pas necessaire.
1. Comment organiseriez-vous le mode opératoire et pourquoi ?

2. De quelle(s) couleur(s) apparaitront les bactéries Gram + et Gram -

J´ai regarder sur Internet et j´ai bien compris que le vert de Malachite etait pour voir les spores des bactéries.Mais sachant qu´on as pas vue cela en Cours je ne sais comment le professeur veux que l´on resoude se Probleme. ESt ce que quelqu´un peux m´eclaircir ?
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[ATPaseNa_K]

en lieu et place du cristal violet et de la safranine

Je n'ai abeuhsolument pas compris ce morceau de phrase...
Je dirais juste que les bactéries Gram - ne se coloreront pas (c'est le principe du "Gram -"...).
Mais sinon, j'avais un prof qui aimait faire ça, et qu'en fait fallait pas chercher plus compliquer que "1+1=2". Tu utilises 2 colorants, un bleu et un jaune, ça donne du...noir...? (Synthèse additive ? jaune (rouge + vert) + bleu = noir ?) Tes bactéries Gram + se coloreront en noir ? x)

[aurore268]

En remplacement de la coloration Gram on utilise le bleu de methylene et le vert de malachite

[ATPaseNa_K]

Ok. Oui donc en fait si ces deux colorants se comportent comme la coloration de Gram, tes bactéries Gram + uniquement se coloreront en noir, je pense...

[A voir en vidéo sur Futura]

[elle-]

Bonjour,
pour moi elles seront bleues et vertes car sur un gram classique elles sont roses: fuchsine ou safranine (colorant rose) et violettes : violet de gentiane ou cristal violet (colorant violet).
Apres pour le protocole je laisserais le lugol pour fixer le colorant

[aurore268]

Justement elle dit que le mordancage n´est pas necessaire..
Sans le lugol est ce que la couleur peut tout de meme se fixer ?

[elle-]

si tu met de l'alcool sans lugol la coloration violette tiendra pas. Pour mieux comprendre, un Gram classique :
1) violet de gentiane : colore toutes les bacteries
2) rincer à l'eau
3) lugol : fixe le violet
4) rincer à l'eau
5) alcool : decolore les gram - qui deviennent transparants
6) rincer à l'eau
7) fushine : rendre les gram - rose pour les voirs au microscope
8) rincer à l'eau
9) secher la lame
10) observer au microscope

sans mordant le violet n'est pas fixé, apres je n'ai jamais essayer de faire de gram sans lugol, faudrait tenter pour etre sur