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Extraction du plasmide



  1. #1
    Namyo68

    Extraction du plasmide

    Bonjour,

    Je suis actuellement en terminale STL biotech et je dois faire un PTA
    J'ai fait pour mon TP une extraction de plasmide grâce au GeneJET Plamsid Miniprep Kit
    Je voulais savoir à quoi servent les différents réactifs:
    - Solution de Resuspension
    -Lysis Solution
    -Neutralisation Solution
    -Solution lavable
    -RNase
    -Tampon

    Je sais qu'il y a de l'EDTA et du SDS mais je ne vois a quoi ça correspond

    J'ai cherché mais les sites sont en anglais et on parle pas de ce Kit en Français Pouvez-vous m'aider svp

    Merci

    -----


  2. Publicité
  3. #2
    Loupsio

    Re : Extraction du plasmide- IMPORTANT

    La composition exact des kits n'est jamais totalement donnée (ils vont pas couler leur fond de commerce en révélant leurs secret de fabrication ), mais par exemple la solution de resuspension est une solution, ou plutôt un tampon qui permet la conservation des éléments souhaités,
    la solution de lyse (comme son nom l'indique) va détruire les bactéries afin que les plasmides se retrouvent dans ta solution et non pas inaccessibles, protégées dans les bactéries.
    la solution de neutralisation neutralise l'effet de la solution de lyse une fois que tes bactéries sont lysées car a long terme ça peut être néfaste pour ton plasmide, et il me semble (mais je ne suis plus sur) que dans ce kit la neutralisation entraîne aussi la "coagulation" des débris bactériens qui apparaissent sous forme de nuage blanc dans ton tube afin de pouvoir mieux les éliminer par centrifugation
    les RNase je pense que tu l'aura deviné par toi même, servent a empêcher l'action des RNase présente dans ta solution (qui seraient issus des bactéries ou de contamination par exemple) et qui risqueraient de dégrader ton plasmide

  4. #3
    Saswordz

    Re : Extraction du plasmide- IMPORTANT

    Citation Envoyé par Loupsio Voir le message
    les RNase je pense que tu l'aura deviné par toi même, servent a empêcher l'action des RNase présente dans ta solution (qui seraient issus des bactéries ou de contamination par exemple) et qui risqueraient de dégrader ton plasmide
    D'accord avec tout ce que tu as dit avant mais alors là non !
    Une RNase est une protéine qui va dégrader les ARN et non pas les RNase. La RNase utilisée pour la Miniprep sert à obtenir réellement de l'ADN et pas un Mix ADN/ARN comme tu peux l'avoir si jamais ta RNase est peu active ou inactivée.

  5. #4
    Loupsio

    Re : Extraction du plasmide- IMPORTANT

    EUh oui désolé j'avais a l'esprit "inhibiteur de RNase" dont on se sert souvent en biologie moléculaire , je venais juste de finir une extraction ARN avant de rentrer chez moi et voir cette question, ^^, c'est effectivement pour avoir juste de l'ADN, merci pour la rectification

  6. #5
    Saswordz

    Re : Extraction du plasmide- IMPORTANT

    Oui je me doute, je venais juste rectifier pour pas que Namyo68 se méprenne

  7. A voir en vidéo sur Futura
  8. #6
    Namyo68

    Re : Extraction du plasmide- IMPORTANT

    Merci beaucoup de votre réponse,

    J'ai vu, pour le même kit, que le tampon d'élution (Elution Buffer) est un amortisseur, est-ce exact?

    Merci encore pour vos réponses.

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  10. #7
    Loupsio

    Re : Extraction du plasmide- IMPORTANT

    Tout dépend e ce qu'on entend par amortisseur, pour moi ca veut dire "qui empêche les dégats" un truc du genre comme dans "amortir une chut" ou des amortisseurs de voitures ^^ ducoup je vois pas trop le rapport avec le tampon d'élution là

    Par contre normalement ton tampon d'élution est une solution qui va lier l'ADN avec plus d'affinité que la colonne ne retiens ton ADN (puisque tu as fait plusieurs rincage, il fallait que la colonne retienne l'ADN mais laisse passer les solvant, sur des principes d'affinité, et comme la tu veux récupérer ton ADN, il faut le décrocher de cette colonne avec quelque chose qui a encore pluss d'affinité pour l'ADN que la colonne)

  11. #8
    Saswordz

    Re : Extraction du plasmide- IMPORTANT

    Citation Envoyé par Loupsio Voir le message
    Tout dépend e ce qu'on entend par amortisseur, pour moi ca veut dire "qui empêche les dégats" un truc du genre comme dans "amortir une chut" ou des amortisseurs de voitures ^^ ducoup je vois pas trop le rapport avec le tampon d'élution là

    Par contre normalement ton tampon d'élution est une solution qui va lier l'ADN avec plus d'affinité que la colonne ne retiens ton ADN (puisque tu as fait plusieurs rincage, il fallait que la colonne retienne l'ADN mais laisse passer les solvant, sur des principes d'affinité, et comme la tu veux récupérer ton ADN, il faut le décrocher de cette colonne avec quelque chose qui a encore pluss d'affinité pour l'ADN que la colonne)
    Je connais pas tous les kits, mais je sais qu'en général l'ADN est fixé sur la colonne en présence de fortes concentrations en sel, du coup j'aurai tendance à dire que le tampon d'élution va permettre de diminuer les concentrations en sel pour que l'ADN se décroche et retombe dans ton tube (comme la gentille petite molécule qu'il est !)
    Après je n'en suis pas sûr et je ne parle que d'un kit que je connais.

  12. #9
    Namyo68

    Re : Extraction du plasmide- IMPORTANT

    Merci beaucoup pour vos réponses j'ai beaucoup avancé avec ça. J'ai pris note de ce que vous m'avez dit et je vais en faire bon usage.

    Merci

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