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Mesurer le taux de transfection ?



  1. #1
    fxmulder

    Mesurer le taux de transfection ?


    ------

    Bonjour à tous !

    Je me posais une question, comment peut on mesurer le taux de transfection par un virus dans des cellules humaines ?

    Pour les cellules bacteriennes, on peut facilement le faire avec les plages de lyse, mais pour les cellules humaines, je ne vois pas...

    Une idée ?

    Merci beaucoup!
    FXMULDER

    -----

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  3. #2
    Yoyo

    Re : Mesurer le taux de transfection ?

    saalut

    tu modifies le virus pour y inserer une gene rapporteur (lacZ) puis tu transfectes, ensuite sur une partie, tu fixes tes cellules et tu reveles la presence de l'enzyme par un teste enzymatique (X-gal). Les cellules transfectées se coloreront en bleue

    yoyo

  4. #3
    Vinc

    Re : Mesurer le taux de transfection ?

    Salut!
    Je pense que tu peux également visualiser ton taux de transfection en apportant un gène de résistance (Néo par exemple) et en sélectionant à la Néo! Tu vas avoir une quantité de cellule isolées égale à ton efficacité de transfection mais bien sûr ca impose de savoir combien tu transfectes de cellules initialement. Tu auras certainement des faux positifs (surtout si tu travailles avec des bactos et que tu as des satellites) mais je pense que tu en auras aussi avec LacZ, et sûrement en quantités équivalente non?
    Tu confirmes chef???

    Vinc
    Primum non nocere.

  5. #4
    jeanlain

    Re : Mesurer le taux de transfection ?

    Neo c'est la resistance à la neomycine, non ? Les cellules humaines y sont sensibles ?

    Et sont-elle capables de traduire l'operon lactose d'E. coli ?

  6. #5
    Vinc

    Re : Mesurer le taux de transfection ?

    Citation Envoyé par jeanlain
    Neo c'est la resistance à la neomycine, non? Les cellules humaines y sont sensibles?
    Oui et c'est pour cette raison qu'on utilise la Néo pour les cellules eucaryotes, car elles ne sont pas sensibles aux antibios classiques...
    Primum non nocere.

  7. A voir en vidéo sur Futura
  8. #6
    Jean-Luc P

    Re : Mesurer le taux de transfection ?

    Citation Envoyé par jeanlain
    Neo c'est la resistance à la neomycine, non ? Les cellules humaines y sont sensibles ?
    Oui mais attention certaines lignées sont déjà résistantes (si tu utilises des lignées cellulaires).
    Jean-Luc
    La violence est le dernier refuge de l'incompétence.
    Salvor Hardin

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  10. #7
    Jean-Luc P

    Re : Mesurer le taux de transfection ?

    Citation Envoyé par jeanlain
    Et sont-elle capables de traduire l'operon lactose d'E. coli ?
    Il y a des lacz "eucaryotisés" modifiés de sorte que...
    Jean-Luc
    La violence est le dernier refuge de l'incompétence.
    Salvor Hardin

  11. #8
    Vinc

    Re : Mesurer le taux de transfection ?

    Citation Envoyé par Jean-Luc P
    Oui mais attention certaines lignées sont déjà résistantes (si tu utilises des lignées cellulaires).
    Heu oui.....mais tout comme certaines bactos sont résistantes aux antibiotiques....

    Vinc
    Primum non nocere.

  12. #9
    fxmulder

    Re : Mesurer le taux de transfection ?

    Merci pour vos réponses !

    En fait, j'essayais de penser a une experience sans modifier le virus... Est ce que existe des lignées cellulaires humaines qui par exemple exprime la GFP quand elles sont infectées... genre un gene plasmidique GFP avec un promoteur activé par un facteur viral... Vous pensez que c'est commercialisé ? Quel facteur viral pourrait etre utilisé dans ce cas ?

    Merci beaucoup !
    FXMULDER

  13. #10
    Jean-Luc P

    Re : Mesurer le taux de transfection ?

    A ma connaissance ça n'existe pas... Sinon je prendrais un promoteur d'un gène tardif viral (genre un gamma d'herpesvirus...)
    Jean-Luc
    La violence est le dernier refuge de l'incompétence.
    Salvor Hardin

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