Bonjour à tous !
Je me posais une question, comment peut on mesurer le taux de transfection par un virus dans des cellules humaines ?
Pour les cellules bacteriennes, on peut facilement le faire avec les plages de lyse, mais pour les cellules humaines, je ne vois pas...
Une idée ?
Merci beaucoup!
FXMULDER
saalut
tu modifies le virus pour y inserer une gene rapporteur (lacZ) puis tu transfectes, ensuite sur une partie, tu fixes tes cellules et tu reveles la presence de l'enzyme par un teste enzymatique (X-gal). Les cellules transfectées se coloreront en bleue
yoyo
Salut!
Je pense que tu peux également visualiser ton taux de transfection en apportant un gène de résistance (Néo par exemple) et en sélectionant à la Néo! Tu vas avoir une quantité de cellule isolées égale à ton efficacité de transfection mais bien sûr ca impose de savoir combien tu transfectes de cellules initialement. Tu auras certainement des faux positifs (surtout si tu travailles avec des bactos et que tu as des satellites) mais je pense que tu en auras aussi avec LacZ, et sûrement en quantités équivalente non?
Tu confirmes chef???
Vinc
Neo c'est la resistance à la neomycine, non ? Les cellules humaines y sont sensibles ?
Et sont-elle capables de traduire l'operon lactose d'E. coli ?
Oui et c'est pour cette raison qu'on utilise la Néo pour les cellules eucaryotes, car elles ne sont pas sensibles aux antibios classiques...Envoyé par jeanlain
Oui mais attention certaines lignées sont déjà résistantes (si tu utilises des lignées cellulaires).
Jean-Luc
La violence est le dernier refuge de l'incompétence.
Salvor Hardin
Il y a des lacz "eucaryotisés" modifiés de sorte que...
Jean-Luc
La violence est le dernier refuge de l'incompétence.
Salvor Hardin
Heu oui.....mais tout comme certaines bactos sont résistantes aux antibiotiques....
Vinc
Merci pour vos réponses !
En fait, j'essayais de penser a une experience sans modifier le virus... Est ce que existe des lignées cellulaires humaines qui par exemple exprime la GFP quand elles sont infectées... genre un gene plasmidique GFP avec un promoteur activé par un facteur viral... Vous pensez que c'est commercialisé ? Quel facteur viral pourrait etre utilisé dans ce cas ?
Merci beaucoup !
FXMULDER
A ma connaissance ça n'existe pas... Sinon je prendrais un promoteur d'un gène tardif viral (genre un gamma d'herpesvirus...)
Jean-Luc
La violence est le dernier refuge de l'incompétence.
Salvor Hardin
