Bonjour,
J'aimerais savoir si ma compréhension a été la bonne.
Déjà l'article : http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/arti...00059-0034.pdf
Dans cet article les auteurs veulent savoir si les études de régulation d'un gène ayant des promoteurs activés par l'AMPc ne sont pas faussés en utilisant la luciférase comme gène rapporteur. Ils font l'hypothèse que l'AMPc pourrait en effet modifier l'activité de la luciférase en se fixant sur la protéine directement et donc perturber les résultats, en dehors de l'activation du promoteur.
Pour cela ils prennent un gène rapporteur autre que la luciférase et voient que par rapport au contrôle (pas d'agent augmentant l'AMPc) il n'y a pas modification de l'activité de la protéine, ils font pareil avec la luciférase et par rapport au contrôle il y a augmentation de l'activité de la luciférase. Donc pas "normal" puisque les deux gènes rapporteurs ont été mis sous le même promoteur à chaque fois, la réponse devrait donc être identique entre "contrôle" et "augmentation AMPc".
Quand ils mettent un AMPc non hydrolysable (ou bloquent la PDE) il n'y a plus cette augmentation d'activité.
À ce stade je fais donc l'hypothèse que l'élément interagissant avec la luciférase est situé en aval de l'AMPc dans la chaîne de transduction. Ce n'est pas l'AMPc lui-même.
Dans la figure avec les courbes ils veulent donc savoir quelle molécule modifie l'activité luciférase (ATP, ADP ou AMP).
En gros avec une luciférase purifiée isolée de la cellule (1 b) ils ont diminution de l'activité cette fois-ci quand ils mettent l'ATP, ADP ou AMP. Et rien avec l'AMPc (ce qui confirme mon hypothèse ci-dessus).
Pour la luciférase intracellulaire (non purifiée) ils font pareil et l'activité diminue également sauf pour l'ATP qui ne modifie plus l'activité luciférase.
Néanmoins le profil de variation de l'activité est différent.
À ce stade je dis que si dans les mêmes conditions (ATP, ADP ou AMP) l'activité luciférase n'est pas contrôlée de manière identique alors ça vient forcément du contexte, il doit y avoir d'autres interactions dans la cellule et la résultante des effets sur l'activité luciférase n'est pas la même que quand la luciférase est seule et isolée.
Mais même dans un contexte cellulaire on voit que l'ATP, ADP ou AMP ajoutés seuls ont tendance à diminuer l'activité luciférase et non plus à l'augmenter comme avec les résultats de la table 1, j'ai pensé que la forskoline et le PGE1 n'agissaient pas uniquement sur le système AMPc/ATP/ADP/AMP mais interagissaient avec d'autres voies dans la cellule, ce qui explique que l'AMP seul par exemple n'augmente pas l'activité luciférase mais la diminue. Et donc on ne reproduirait pas la signalisation forskoline ou PGE quand on met uniquement ATP, ADP ou AMP.
Pour finir j'ai pensé que l'ATP, même seul, devait normalement stimuler la luciférase et la production de lumière (puisque c'est le substrat indispensable). Mais j'ai pensé que la diminution d'activité pouvait s'expliquer par une inhibition par le substrat (courant en enzymo) et l'inhibition par l'AMP pouvait s'expliquer par une inhibition par le produit.
J'ai fait un schéma récapitulatif de ce que je pense avoir compris sur cette signalisation dans leur article :
Je ne sais pas si je vais chercher trop loin (ce que j'ai tendance à faire).
Merci d'avance de vos réponses.
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