SDS et Béta mercapto

[Bouuuh]

Bonjour !
Le SDS et le Béta mercapto permettent t'ils tous les deux de couper une protéine en sous unités ? Et peut on alors dire qu'après passage du B mercapto et du SDS, on obtient uniquement des monomères ?
Merci
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[blisax]

Bonjour,

Le SDS dénature la protéine, il la déplie et coupe les liaisons Hydrogènes alors que le béta mercapto coupe les ponts disulfures (par une réaction d'oxydoréduction). En théorie on obtient que des monomères mais je suppose qu'il existe (comme d'habitude) des contres exemples...

[Bouuuh]

Donc quel que soit l'agent utilisé, tous deux vont conduire à des sous unités, bien que les liaisons rompues ne soient pas les même, c'est bien cela ? Et si l'on n'en utilise qu'un seul, soit du SDS, soit B mercapto, obtient on forcement des monomères, puisque certaines liaisons ne seront pas rompues ?

[blisax]

Si tu n'utilises qu'un des deux tu n'auras pas forcément que des monomères à la fin. Habituellement on utilise les deux ensemble, ainsi le western blot se fait classiquement en condition dite réductrice (beta-mercaptoethanol) et dénaturante (dodécylsulfate de sodium)

[A voir en vidéo sur Futura]

[Niiox]

Salut,
Attention, dénaturer une protéine par SDS et B-mercaptoéthanol ne "coupe" pas la protéine, elle la dénature (la déplie) tout simplement, donc si tu as des liaisons inter-chaines elles sont dénaturées et donc les sous-unités se libèrent.

En théorie, si tu utilises les deux tu devrais avoir des monomères.

Le SDS permet également de charger négativement tes protéines, ce qui permet de les séparer par éléctrophorèse... Il est donc indispensable.
Cependant, le B-mercaptoéthanol (deja est toxique) et n'est pas forcément indispensable en routine (après tout dépend ton type de protéines aussi ...). Mais ce dernier, permet de s'assurer que ta protéine est entièrement "déplié" et donc que la migration dépend bien du poids moléculaire des protéines et non leurs formes.