Aide pour comprendre correction exercice sites restriction vecteur recombinant

[invitead7b5233]

Bonjour à tous,
J'ai passé quelques heures à essayer de comprendre la correction de mon exercice, notamment pour placer les sites de restriction du plasmide recombinant , en m aidant des puits pour connaitre la taille des bandes. Mais je ne comprends toujours pas pourquoi la correction place ces cites à ces endroitss , par exemple , pourquoi ClaI n'est pas tout simplement à la 422 è pb?
Merci d'avance
Je vous joins la carte de restriction du plasmide non recombinant ( avec 4363 pb), le resultat des puits et la correction avec les sites de restriction du plasmide recombinantCapture2.PNGCapture3.PNG
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[invitec9f0f895]

Salut
ta digestion par ClaI donne deux fragments. cela signifie qu'il y a deux sites claI. Le premier est dans ton plasmide (position 23), le second doit etre a 422 nt de ce premier site pour générer un fragment de 422nt, il est donc placé sur le plasmide à la position 422+23 soit 445.

Yoyo

[invitead7b5233]

d'accord, merci pour votre réponse, je comprends mieux pour ClaI; Par contre je ne comprends pas pourquoi Pst I , qui est maintenant à 5718 dans le plasmide recombinant, on ne lui soustrait pas la distance entre 4080 et 1621 pour trouver son avant-dernier site de coupure? Pourquoi 5718-4080 et non pas 5718-(4080-1621). C'est bien une "taille" en nt que donne un puit? Pour Pst I , je crois lire 3 coupures donc 3 sites de restriction avec 3 tailles (4080-1621), (1621-771) et (771), je dois me tromper... désolée, ca doit vous paraitre assez evident en plus, mais la logique la je l ai pas

[invitead7b5233]

je crois que je lis mal les puits. en fait la distance par exemple pour pst n'est pas entre 4080 et 1621 mais 4080, la deuxieme bande fait 1621 et la troisieme 771?

[A voir en vidéo sur Futura]

[invitead7b5233]

je crois avoir mieux compris
Pour PstI, je vois que j ai 3 sites de restriction, dont 1 sur vecteur non recombinant, donc les 2 autres dans l insert. Il faut que j'ote 4080 à 5718 pour avoir mon deuxieme site dans l'insert ( dans l'autre sens, je suis hors insert) et pour le troisieme site, je pourrais retrancher 1621 mais encore une fois hors inssert ( Pst(17)) donc je lui retranche 771 et j'obtiens mes 3 bandes aux bonnes tailles de pb? c'est mieux?

[invitec9f0f895]

Salut

Oui c'est mieux

Yoyo

[invitead7b5233]

merci beaucoup pour votre aide
bonne journée